兼性寡营养北里孢菌的分离鉴定及形态分化

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chouyez
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寡营养微生物的培养有着不可替代的意义。本研究对原位土壤环境测定,运用稀释平板法分离筛选寡营养微生物,得到具有兼性寡营养生长的菌株。使用引物扩增,对其PCR扩增测序结果进行序列比对,在分子生物学水平上进行鉴定。使用鉴定培养基确认培养特征及菌落特征,使用显微操作技术记录菌丝体与孢子体形态学特征。综合鉴定结果,将菌株鉴定到种。通过对菌株进行饥饿胁迫处理,记录形态分化对饥饿胁迫响应,对结果进行统计分析。结果如下:1.土壤随着深度的增加,土壤中的有机质,腐殖质,全碳含量及速效氮均显著变化(P<0.05)。深层土壤的CO2浓度相比表层土壤显著升高(P<0.05)。原位土壤中放线菌纲含量丰富且差异显著(P<0.05)。综上确定模拟培养的CO2浓度以筛选寡营养微生物,并确定了放线菌纲作为目的菌种的筛选方向。2.在AMS培养基及Bennett培养基上筛选,有三株链霉菌可传代培养。其中10号菌株在Bennett液体培养基下形态稳定,以短孢子链形态进行富营养生长,可测定其生长曲线。使用稀释平板法统计菌落数,并以菌悬液吸光度值绘制标准曲线与生长曲线。其在AMS寡营养培养基上可生长,菌落为白色,特征与链霉菌相似。鉴定结果表明,其DNA的PCR扩增产物对Ks Pr特异性引物显阳性。对其16S r DNA的PCR测序结果分析并比对,10号菌与Kitasatospora phosalacinea相似度最高。综合镜检结果,其形态与北里孢菌属形态特征一致,临时命名为K.phosalacinea 10。3.K.phosalacinea 10在形态分化方面存在对饥饿胁迫的响应。在AMS液体培养基下,K.phosalacinea 10以寡营养代谢模式生存,为不定型菌丝团形态。在氮胁迫培养条件下,K.phosalacinea 10以纺锤状菌丝团形态生长生存。富营养培养时,K.phosalacinea10为短孢子丝链形态,无菌丝体存在。K.phosalacinea 10,在Bennett液体培养基中为短孢子丝链形态且无菌丝团,可测定稳定的生长曲线。这有助于实时检测其生长状态,在工业发酵中存在应用价值。
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