Hela细胞M期促进因子(MPF)的初步纯化及其对未成熟卵母细胞的体外促成熟作用分析

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该课题的第一个目的是为了摸索从有丝分裂的Hela细胞中、初步纯化M期促进因子(MeF)的合适方法,鉴定提取物、初步纯化产物中MPF活性物质.本实验首先利用秋水仙胺使Hela细胞阻滞在有丝分裂的中期(M期),在不同培养基、不同培养时间的条件下,得到不同的有丝分裂中期指数,及阻滞的中期指数;结果表明,有丝分裂细胞的中期指数平均为94%,从而可以获得较高的含M期促进因子的蛋白含量.然后通过比较饱和硫酸铵溶液在不同pH值、及不同体积百分比的情况下,沉淀分离蛋白质溶液的效果,所得到的结果表明,饱和硫酸铵沉淀的平均回收率为23.94%.通过连续的Sephdex G-150、DNA-Cellulose柱层析,及高效液相色谱(HPLC)分离,得到由三个波峰组成的产物;最后利用Western Blotting,检测到了提取物、初步纯化产物中的MPF中Mr34KD的成分.初步纯化产物的生物学活性在以后的实验中进一步分析.第二个个目的,是为了分析Hela细胞MPF提取物促进未成熟卵母细胞、体外提前成熟的生物活性作用,并通过制备中期染色体而进行细胞遗传学分析.将MPF提取物显微注射到昆明小白鼠未成熟的卵母细胞中,诱导其提前恢复减数分裂,结果表明:注射组较对照组提前观察到了、GVBD发生以及极体排出高的现象.并且,注射后的卵母细胞,通过染色体的制备及显带,观察到了中期相染色体.这些结果说明,MPF提取物具有诱导未成熟卵母细胞提前恢复减数分裂的生物学作用.
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