肝细胞癌(HCC)是全球最流行的恶性肿瘤之一,并且其高死亡率和高复发率一直是困扰临床治疗的难题。随着对HCC发展的分子机制和治疗耐药性认识的增强,临床研究者已经开发出许多分子靶向药物,并成为当前抗HCC药物研究的重点之一。这些药物可能靶向癌症发展中重要的一个或多个关键信号传导通路,例如细胞增殖,细胞凋亡和血管生成等。衔接蛋白Gab2作为支架分子,不仅在细胞异常增殖、侵袭、迁移等病理过程中发挥重要的作用,而且在信号转导中也扮演了重要的角色,使得其在人类癌症的发生、发展中所发挥的作用备受关注。本实验室过往的研究表明,Gab2在肝癌中的表达显著高于癌旁或正常组织细胞,并且过表达Gab2的肿瘤细胞的增殖,迁移及侵袭能力常常高于相应的癌旁或正常组织细胞。肝癌细胞中Gab2的高表达现象是由许多因素与调控机制共同作用形成的,而microRNA的调控表现的至关重要,并且异常表达的microRNA作为生物标志物可以用作HCC早期诊断以及预后治疗的分子靶点,因此我们对靶向调控Gab2蛋白的microRNA进行了探索。本课题利用生物信息学网站及软件对可能调控Gab2的microRNA进行预测,筛选出9个microRNA,并在肝癌细胞系HepG2、正常肝上皮细胞系HL-7702和Gab2相关肝癌细胞系中检测它们的表达,进一步筛选出与Gab2表达相关的4个microRNA。随后转染miRNA mimic检测Gab2蛋白表达水平,发现hsa-miR-9和hsa-miR-181a能够稳定的抑制Gab2蛋白的表达,证明了 Gab2是hsa-miR-9和hsa-miR-181a的下游靶基因。同时,我们分别构建了含有hsa-miR-9和hsa-miR-181a与Gab2基因3’UTR预测结合位点的重组质粒及突变结合位点质粒,通过双荧光素酶报告基因系统确定了其结合位点。然后我们转染hsa-miR-9 mimic和hsa-miR-181a mimic检测Gab2的mRNA表达水平,初步探究了hsa-miR-9和hsa-miR-181a靶向调控Gab2的分子机制。此外,我们还发现了过表达的hsa-miR-9和hsa-miR-181a能够影响肝癌细胞的迁移与增殖,提示其在肝癌细胞中很可能通过靶向Gab2来发挥抑癌作用。本课题为Gab2参与信号转导调节肝癌进程之间的关系提供了有价值的理论参考,并为肝癌的风险预测及预后治疗提供了新的思路。