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大鲵(Andrias davidianus)俗称“娃娃鱼”,属两栖纲(Amphibia)有尾目(Caudata)隐鳃鲵科(Cryp tobranchidae)大鲵属(And rias)，它是一种水生到陆生之间的过度物种,在进化上十分原始,也是我国特有的珍稀野生动物,主要分布在长江中上游、汉水上游及珠江中上游的深山峡谷的溪流中，其对生存水质要求较高，喜清澈水质，并且喜欢低温。由于近些年来大鲵生存环境日益恶化,如环境污染、人为捕杀等,造成大鲵自然资源的严重衰竭。因为大鲵属于我国的濒危珍惜保护动物，所以目前对大鲵的研究主要集中在保护遗传学方面,这些研究对大鲵的种质资源管理和人工增殖提供了重要的意义，而相对关于大鲵皮肤活性物质的相关研究则较少。本研究对从大鲵皮肤cDNA文库中分离获得大鲵α1-血红蛋白基因和大鲵胸腺素β-4基因进行生物信息学分析其全长cDNA序列。其中利用在NationalCenter for Biotechnology Information（NCBI）中进行BLASTN和BLASTX序列的相似性分析及基因注释，用ScanSite pI/Mw分析蛋白质性质，singalP4.0查找信号肽，Protscale分析疏水结构，TMHMM预测跨膜结构，再用SMART软件进行蛋白质特征模体检测，跨膜螺旋预测使用Tmpred软件，SPOMA预测二级结构，Phyre进行验证，Swiss-model做三级结构预测。利用qRT-PCR方法对大鲵α1-血红蛋白基因和胸腺素β-4基因在肠、肌肉、皮肤、胃、肾、肺、肝脏等组织中的表达进行荧光定量检测。获得了如下结果：（1）、生物信息学分析表明，本研究获得的大鲵α-血红蛋白基因全长cDNA序列为594bp，开放阅读框共432bp，编码144个氨基酸，编码的大鲵α1-血红蛋白推测的理论分子量为16048.3u，等电点为6.44。氨基酸组成中酸性氨基酸11.9%，中性氨基酸69.9%，碱性氨基酸18.2%。结构分析表明该蛋白没有信号肽，但在100-122个氨基酸处以及98-122个氨基酸处分别有由里向外、由外向里的跨膜螺旋区，二级结构以α-螺旋为主。氨基酸序进行同源性列比对表明与人、猕猴的亲缘关系最近，同源性达到63.0%，其次是和小鼠、猪、爪蟾，同源性为59.0%左右，而和牛蛙的亲缘关系最低只有46.7%。荧光定量PCR结果表明，α1-血红蛋白基因在肌肉中表达量最高，在胃中最低。（2）、大鲵胸腺素β-4基因全长共699bp,其中开放阅读框204bp，5’-UTR87bp，3’-UTR为474bp；该基因编码68个氨基酸，其中包含43个成熟肽，理论分子量为7649.7u，等电点为5.81。大鲵胸腺素β-4结构分析表明该蛋白的第7到43位有“THY”特征模体，没有跨膜螺旋区、细胞外跨膜结构域；氨基酸序列进化关系表明，大鲵与人、小鼠等哺乳动物同源性最高，其次是猪、鸡，与爪蟾、倭蛙属的同源性为80.0%，与斑马鱼最低为62.2%；荧光定量PCR结果表明，胸腺素β-4基因在肺中表达量最高。除此之外，本试验在构建大鲵胸腺素β-4原核表达载体时，采用全人工合成，将大鲵Tβ4基因中Arg、Gly、Leu等7个氨基酸稀有密码子改造为大肠杆菌偏爱的密码子，并将合成的大鲵胸腺素β-4成熟肽和pET32a载体上的硫氧化还原蛋白、HisTag融合表达，蛋白质电泳检测表明，重组菌在IPTG诱导4小时后在接近26kDa处获得融合表达蛋白，该蛋白在除去融合表达的硫氧化还原蛋白、HisTag后，分子量为5kDa，和预期的目标蛋白大小一致。表明大鲵Tβ4原核表达载体构建成功，将为进一步研究该基因对大鲵各项生理调节机制奠定基础。