DC-CIK对白血病细胞HL-60杀伤作用的实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ericli2009
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目的:研究DC-CIK细胞对早幼粒白血病细胞株HL-60的杀伤作用,为开展临床细胞治疗及肿瘤研究提供科学的实验数据。  对象及方法:  1.采集健康人外周血,提取单个核细胞(PBMC),制备DC、CIK与DC-CIK细胞;采用流式细胞术鉴定其免疫表型;  2.采用流式细胞术分析CIK及DC-CIK细胞的增殖能力;  3.采用ELISA双抗体夹心法检测CIK及DC-CIK细胞分泌IL-12和IFN-γ水平。  4.采用MTT比色法测定不同效靶比CIK和DC-CIK细胞对HL-60细胞株的杀伤活性。效靶比设计为:CIK/DC-CIK﹕HL-60分别为2.5﹕1、5﹕1、10﹕1及20﹕1,选择临床最适效靶比。  结果:  1.成功制备DC、CIK与DC-CIK细胞。其中DC细胞免疫表型为:CD1a+、CD83+、CD14+;CIK细胞免疫表型为:CD3+CD8+、CD3+CD56+。  2.DC-CIK细胞增殖倍数高于CIK细胞增殖倍数(p<0.05)。DC-CIK细胞培养12d、15d,CD3+CD8+细胞比例分别为(53.3±3.8)%和(71.8±1.8)%、CD3+CD56+细胞比例为(32.5±2.8)%和(48.6±2.2)%,显著高于同期单独培养的CIK细胞(39.9±3.1)%和(60.4±3.3)%、(21.4±2.0)%和(33.4±2.2)%(p<0.05);  3.培养第15d检测DC-CIK细胞组IL-12分泌水平为30.7±9.1pg/ml、IFN-γ分泌水平为438.1±213.4pg/ml均高于CIK细胞组IL-1210.1±0.4pg/ml和IFN-γ214.0±137.0pg/ml(p<0.05)。  4.四种效靶比CIK/DC-CIK﹕HL-60分别为2.5﹕1、5﹕1、10﹕1及20﹕1均提示DC-CIK细胞杀伤率大于CIK细胞;DC-CIK细胞杀伤率分别为(19.1±2.0)%、(30.4±1.2)%、(43.5±4.8)%、(55.6±4.5)%,均显著高于CIK细胞杀伤率(12.9±4.4)%、(20.2±2.6)%、(32.4±3.8)%、(41.8±2.8)%(p<0.05),DC-CIK组内比较,其杀伤活性逐渐增加,但在10﹕1与20﹕1比较无统计学差异。  结论:  1.成功制备了DC和CIK细胞,建立了DC-CIK细胞共培养体系。  2.DC-CIK细胞共培养后IL-12和IFN-γ分泌水平较单独CIK细胞分泌水平升高。  3.DC-CIK细胞共培养可提高CIK细胞对HL-60细胞株的杀伤作用。  4.DC-CIK细胞对白血病细胞HL-60的杀伤活性最佳效靶比为10﹕1。
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