南江黄羊IGFBP-1和IGFBP-5基因CDS区克隆与组织表达

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IGFBPs在体内循环系统中能与IGFs结合,调控IGFs的半衰期,提高IGFs的生理活性。肝脏和局部组织分泌的IGFBPs共同调控各个组织的生长与发育,从而促进动物机体的生长。本研究以培育品种南江黄羊为试验材料,应用RT-PCR和克隆技术从南江黄羊生后Od的肝脏组织总RNA中克隆出南江黄羊IGFBPs基因家族中的IGFBP-1和IGFBP-5两个基因的全编码区序列。采用SYBR-greenⅠ定量PCR技术研究了南江黄羊在生后0d、15d、30d、60d、90d、120d等6个时间点IGFBP-1基因和IGFBP-5基因性别之间表达差异、组织表达差异和同一组织在不同时间点的发育性变化。结果表明:(1)克隆得到南江黄羊IGFBP-1和IGFBP-5基因的CDS全序列,长度分别为792bp和816bp,分别编码263和272个氨基酸。山羊IGFBP-1基因的核苷酸、氨基酸序列和绵羊的一致性分别为99%和98%,与其他物种间的一致性也较高。山羊IGFBP-5与绵羊的一致性分别为98%和99%,与其他物种的一致性在80%以上。(2)生物信息学分析表明IGFBP-1基因的氨基酸序列整个序列中具有明显的疏水性区域,而IGFBP-5基因的氨基酸序列中具有明显的亲水性区域。在IGFBP-1和IGFBP-5中都具有2个跨膜区,并且都具有信号肽。翻译后修饰主要为磷酸化和糖基化,二级结构以无规卷曲为主,其次为α-螺旋,β-折叠最少。进化树分析表明,IGFBP-1与IGFBP-5蛋白氨基酸序列与哺乳动物的同源性较高。(3)在各个时间点的各个组织中都检测到IGFBP-1和IGFBP-5基因的表达,但相对表达量存在一定的差异。IGFBP-1和IGFBP-5主要产生于肝脏组织,它们在肝脏组织的基因表达量远远高于心脏、脾脏、肺脏和肌肉等组织的表达量(0.01<P<0.05或P<0.01),在肌肉组织中的表达量最低。(4)IGFBP-1和IGFBP-5基因在南江黄羊在肌肉组织中都有表达的优势时间点,两个基因在肌肉中的表达规律都表现先上调后下降的趋势。其中,肌肉组织中IGFBP-1基因表达量在生后60d达到最大值。在背最长肌和半膜肌中,IGFBP-5基因的表达量在生后90d时达到最大值,而在臂三头肌和臀股二头肌中在生后60d时达到最大值。
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