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目的:通过对哮喘模型小鼠腹腔注射重组德国小蠊变应原制剂Bla g 2(rBla g 2)进行免疫治疗,探讨重组蛋白rBla g 2制剂在过敏性哮喘抗原特异性免疫治疗中的疗效及机制。方法:1、重组蛋白rBla g 2变应原制剂的克隆、表达。2、18只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,即正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)和重组蛋白rBla g 2治疗组(C组)。B、C两组用Al(OH)3佐剂乳化的重组蛋白rBla g 2腹腔注射免疫,剂量为每次50μg/(只·次),共3次,每次间隔1周。A组以生理盐水50μl代替变应原。末次致敏后2周,进行免疫治疗,C组小鼠腹腔注射rBla g 2,100μg/(只·次),每2天1次,连续8次。A、B2组以磷酸盐缓冲液(PBS)100μl代替变应原。末次治疗后1周,进行滴鼻激发,将所有小鼠麻醉后,B、C 2组以rBla g 2滴鼻,50μg/(只·次),每天1次,连续7天。A组以PBS代替变应原滴鼻。从第51天(激发第一天)开始,每天下午4点在动物中心观察各组实验小鼠的症状和体征,到第57天结束。所有小鼠最后一次滴鼻24 h后进行下列各项检测。3、使用全身性体积描记法观察最后1次滴鼻24 h后各组小鼠雾化吸入PBS缓冲液和1、3、10、30、100 mg/ml乙酰甲胆碱后扩大间隙(Penh)值的变化,绘制呼吸曲线,观察气道Penh值的变化。4、各组小鼠气管插管进行支气管肺泡灌洗,显微镜下观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类。5、各组小鼠用ELISA试剂盒检测血清中IgE和IgG2a抗体。6、各组小鼠取肺组织,常规HE染色观察小鼠肺的炎症变化。7、各组小鼠的肺组织通过免疫组化观察Bcl-2阳性嗜酸性粒细胞(EOS)的细胞数量变化。8、各组小鼠取脾组织,检测脾组织的TLR-2,4和PAR-2,4受体表达情况。结果:1.与正常对照组相比,哮喘模型组小鼠激发后可见喘息、呼吸加深加快、烦躁不安等症状;气道Penh值增加(P<0.05);BALF中的细胞总数明显增加,分类细胞以嗜中性和嗜酸性粒细胞为主,嗜酸性粒细胞数超过90%;血清特异性抗体IgE、IgG2a明显增加(P<0.01);肺组织可见炎症细胞聚集,组织水肿和上皮损伤;Bcl-2阳性EOS细胞数量明显增加;脾组织PAR-2,PAR-4和TLR-4的表达明显降低,TLR-2的表达无明显变化,证明建模成功。2.与哮喘模型组相比,重组蛋白rBla g 2治疗组小鼠喘息、呼吸加深加快、烦躁不安等症状明显减轻。3.与哮喘模型组相比,重组蛋白rBla g 2治疗组的Penh值下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4.哮喘模型组BALF的细胞总数和EOS数分别为(24.60±15.08)×105/ml和(22.20±3.76)×105/ml,而重组蛋白rBla g 2治疗组细胞总数[(14.30±4.95)×105/ml]和EOS数[(5.20±1.56)×105/ml]显著减少(P<0.01)。5.与哮喘模型组相比,重组蛋白rBla g 2治疗组小鼠血清中rBla g 2特异性IgE明显减少,而IgG2a抗体有明显增加,有显著差异(P<0.01)。6.哮喘模型组小鼠肺组织支气管周围炎症细胞聚集,肺组织上皮损伤,组织水肿,重组蛋白rBla g 2治疗组上述变化明显减轻。7.与哮喘模型组相比,重组蛋白rBla g 2治疗组肺组织Bcl-2阳性EOS细胞数量明显减少且蛋白阳性表达较弱。8.哮喘模型组小鼠脾组织PAR-2,PAR-4和TLR-4的表达较正常对照组明显降低,经重组蛋白rBla g 2治疗后,其表达水平上升,TLR-2的表达无明显变化。9.重组蛋白rBla g 2治疗组小鼠的哮喘症状和体征,气道Penh值,BALF中细胞总数和细胞分类,血清IgE和IgG2a抗体水平,肺组织的炎症情况,Bcl-2阳性嗜酸性粒细胞的表达情况以及脾组织的TLR-2,4和PAR-2,4受体表达情况均接近于正常对照组。结论:重组蛋白rBla g 2制剂通过有效抑制变应原诱导的气道高反应性、过敏性气道炎症和血清IgE抗体的产生,以及促进嗜酸性粒细胞的凋亡而改善了肺组织的炎症症状,从而对过敏性哮喘有治疗作用。