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胎盘滋养层细胞是妊娠早期出现的细胞,也是妊娠早期胎盘的主要成分,具有迁移、侵袭、分泌等作用,参与妊娠早期多个生理过程。近年有大量研究着眼于表观遗传在滋养层细胞中的作用,TET1(Ten-eleven translocation1)作为主动去甲基化过程的重要羟化酶,参与调节滋养层细胞多个生理功能。研究证明,滋养层细胞的迁移和侵袭功能是胚胎着床和血管生成的重要保障,而该功能的正常发挥依赖于基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂(Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMPs)等分子的正常表达。但目前这两类分子在山羊胎盘滋养层中的研究较少,TET1是否可以通过调节MMPs和TIMPs的表达进而影响滋养层细胞的迁移和侵袭功能还不明确,为此,本研究设计了组织试验和细胞试验,研究TET1、MMPs、TIMPs在山羊妊娠早期滋养层中的表达规律,探究TET1对山羊滋养层细胞迁移和侵袭的影响。首先,本研究选取饲养在西南大学种羊场的15只健康、空怀的大足黑山羊青年母羊,进行诱导发情配种,分别取妊娠至20 d、25 d、30 d、45 d和60 d的滋养层,研究TET家族、MMP家族、TIMP家族成员在妊娠早期不同阶段滋养层中的表达变化,并制备TET1基因干扰慢病毒,以永生化山羊滋养层细胞(GTCs)为研究对象,利用实时荧光定量PCR、免疫组化、免疫荧光、Western blot、Transwell小室迁移和侵袭试验等研究TET1对GTCs迁移和侵袭功能的影响。研究结果如下:1、在山羊妊娠早期的滋养层中,TET1基因表达量在25 d时显著高于20 d、30 d、45 d(P<0.05),45 d表达量极显著低于20 d、30 d、60 d(P<0.01)。与TET家族其他成员相较,TET1基因在妊娠20 d时表达量显著高于TET3(P<0.05),极显著高于TET2(P<0.01),在妊娠45 d时极显著低于TET3(P<0.01)。TET1蛋白在胎盘滋养层细胞核和细胞质中均有阳性表达,在妊娠20 d、45 d、60 d强阳性表达较多。同时,在妊娠45 d和60 d的胎盘中发现,TET1在子宫内膜细胞中有弱阳性表达。2、利用293T细胞制备TET1基因干扰慢病毒,向GTCs滴加40μL浓度为3.98×10~8 IU/mL的病毒蛋白,培养48 h,并经12 mg/mL嘌呤霉素药筛48 h后得到能表达绿色荧光的GTCs,且TET1表达显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05)。成功包装TET1基因干扰慢病毒,并摸索出最适添加浓度和药筛浓度,建立shTET1山羊滋养层细胞模型。3、TET1低表达后,GTCs迁移能力显著降低(P<0.05),侵袭能力极显著低于Control组和shControl组(P<0.01),GTCs细胞增殖能力无显著变化。4、TET1低表达后,MMP2和TIMP2表达量显著降低(P<0.05),MMP9表达量极显著低于Control组和shControl组(P<0.01),TIMP1表达量极显著低于Control组(P<0.01),显著低于shControl组(P<0.05),TIMP2表达量显著低于Control组和shControl组(P<0.05)。5、妊娠30 d、45 d、60 d的胎盘滋养层中,MMP9的表达量均高于MMP2,在30 d和60 d差异显著(P<0.05),45 d时差异达到极显著(P<0.01),并且,MMP9的表达规律呈现出妊娠30 d之前较低、妊娠45 d和60 d骤然增高的趋势。除20 d外,TIMP1的表达量均高于TIMP2,且在妊娠30 d和妊娠45 d时具有显著性差异(P<0.05)。TIMP1和TIMP2的表达趋势基本一致,在20 d时较低,在25 d时表达最高,之后呈现逐渐降低的趋势。6、MMP9主要在细胞质和细胞膜上见到阳性表达,45 d、60 d强阳性表达较多。同时,在45 d和60 d的胎盘中发现,MMP9与TET1一样在子宫内膜细胞中有弱阳性表达,两者的分布和表达量存在一定相似性。结论:1、山羊妊娠早期滋养层中,TET家族成员中TET1在早期表达较高,TET3在45 d时表达较高,预示二者可能交替起调节作用。2、TET1低表达后,GTCs迁移和侵袭能力降低,但细胞增殖能力没有显著变化,说明TET1低表达抑制了GTCs迁移和侵袭,但不影响GTCs增殖能力。3、TET1低表达后,MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2基因表达量均有抑制作用,对MMP9和TIMP1基因的抑制作用更显著。4、MMP9和TIMP1可能在迁移和侵袭中起主要作用。且MMP9在山羊妊娠早期胎盘滋养层中的表达变化和定位与TET1具有相似性,说明TET1可能主要通过MMP9和TIMP1影响胎盘滋养层细胞迁移和侵袭。