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椒样薄荷是新疆的一种香料植物,随着种植年限的增加,椒样薄荷精油品质和产量逐渐下降。本实验对椒样薄荷病毒进行了分子鉴定,并建立相应的检测方法,为椒样薄荷无毒化栽培及生产提供理论基础。 从田间采集表现明显病毒症状的椒样薄荷病株,采用纤维素(CF-11)层析方法,对椒样薄荷植株中的病毒dsRNA进行分离,利用改进的单引物法扩增到一段约400bp产物,然后对其进行克隆与测序。得到该片段核苷酸序列为352bp,序列分析表明为黄瓜花叶病毒(CMV)1a基因的部分序列,与其它已报道CMV1a基因序列同源性高达96%。 根据所获病毒信息,设计了3对针对CMV2a基因、2b基因和CP基因特异性引物,对病株进行了相应目标基因的RT-PCR,结果均扩增到预期的目标片段。利用间接ELISA从186个样品中检测出3个样品呈阳性。并利用免疫反转录PCR(IC-RT-PCR)从分离物MP1中检测到CMV,通过体系优化,建立了针对CMV的IC-RT-PCR检测体系,该体系病毒粗提液的稀释限点为10-6。 根据CMVRNA3基因组全长设计特异引物从分离物MP1中扩增到目标片段,将其进行克隆和测序,得到2189个核苷酸,序列分析表明,该序列与其它已报道CMVRNA3组分核苷酸序列同源性达到90%以上;包含2个分别编码3a基因和CP基因的开放阅读框。3a基因为838个核苷酸,编码一个由279个氨基酸组成的蛋白质(分子量为30.6kDa),与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.4%~96.9%,氨基酸同源性为95.4%~99.1%。CP基因为657个核苷酸,编码一个由218个氨基酸组成的蛋白质(分子量为24kDa),与其它已报道CMV的RNA核苷酸同源性为93.9%~96.8%,氨基酸同源性为97.7%~99.1%。基于CMV基因组RNA3上的3a基因和CP基因构建系统关系树,来自伊犁椒样薄荷的CMV与来自福建的PE分离物关系最近,位于同一个进化分支。