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家蚕是一种重要的经济昆虫，是研究昆虫性别调控的理想模式生物。在家蚕中很容易获得多倍体和人工雌雄嵌合体。家蚕的性别决定是无脊椎动物中的一个上位体系模式，因此，家蚕的性别调控机制研究将有助于理解无脊椎动物复杂的性别调控机制。家蚕的性别调控机理也相当复杂，目前，其分子生物学研究还处于起步阶段。 本研究的一部分内容是：通过RAPD-PCR方法来获得雌特异性分子标记，然后通过克隆、测序及序列分析结果，来初步推测该分子标记是否来自于家蚕的W染色体，或是否与家蚕的性别调控相关。最后，进一步通过PCR验证来确证该片段的雌特异性。 dsx基因是位于果蝇性别决定级联末端，控制其性别分化的主基因。Bmdsx是与果蝇dsx基因同源的家蚕基因，最初是从家蚕的EST数据库中得到的。另外，迄今为止，该基因也是唯一的、得到实验研究证明了的家蚕性别调控基因，现有的研究表明，Bmdsx基因不仅在cDNA序列上与dsx基因同源，而且在功能上也具有相同性，即Bmdsx基因是调控家蚕性别分化的主基因。而且，已有的实验研究表明，该基因是一个单拷贝基因。 本研究的另一部分内容是：首先根据Bmdsx的cDNA序列来设计一对特异引物，运用TaKaRa RNA LATM PCR（AMV）1.1试剂盒进行该基因在家蚕组织中的mRNA表达分析，从而，为进行该基因在特定组织中的定量表达分析和Bmdsx基因在家蚕中的RNAi检测实验奠定基础。 1．雌特异性RAPD分子标记的筛选、克隆、测序、序列分析及其雌特异性的验证 以家蚕Y010、C100的雌雄蚕为材料，分别提取基因组DNA。然后运用随机引物来对同一品种家蚕的雌雄基因组DNA进行筛选，通过大量的引物筛选，从中得到一条355hp的雌持异性分子标记。然后对该标记进行了成功的克隆，并进行了序列测定，以及运用blastr和blasin软件进行了序列分析。序列分析结果表明，所得雌特异性分子标记的功能目前还不清楚。最后，又根据所测得的序列进行设计引物，通过Y010、C100和另外的4个品种，共6个家蚕品种进行了对该分子标记的雌特异性验证。从而初步推断该分子标记来自于家蚕的W染色体。当然，是否真正来源于家蚕的W染色体还有待于进一步的实验研究。2．Bm批基因在家蚕不同组织中的表达分析 运用日本东京大学Shimada等人检测Bmdri基因时所设计的引物，采用TakaRa RNA LAuLAuPC…Verl＊试剂盒说明书进行实验操作，最终分析被检测组织中有无 Bmfor基因的InRNA表达。实验结果表明，在家蚕C108（旱，占）5龄6、7天的中肠组 织中均得到了预期的实验结果：在雌蚕的中肠组织中得到了475brt约)特异e带；在雄蚕 中肠组织中得到了226hp特异性条带（而且226hp的主带又得到了克隆、测序及序列分析 鉴定的印证）。即，BIndix基因在雌蚕组织中是以雌特异性方式进行表达的；在雄蚕组织中 是以雄特异性方式进行表达的，这与Shimada等人的实验结果是相吻合的。同时，本部分 研究也有一个新的发现，即在四岛嵌合体化蛹后第8天和第10天的卵巢中，同时得到了 雌（约475hp）．雄(226bpwh两条主带。这说明B，ndri基因mANA在田岛嵌合体中同时以雌 雄两种方式进行表达。结合本实验结果与前人的实验结果可知：①由到目前为止，ffedsx 在所有己被检测过的家蚕组织中均有表达，可初步推断激dsx可能在家蚕的大部分或全部 组织中有表达，是否确实是这样，还有待于进一步进行研究。②家蚕的性别分化在胚胎早 期就形成了，但BmdSX基因从幼虫期到成虫期均有表达，这说明该基因可能和dsx基因对 于果蝇拥有某种性别表型中是必不可少的这一点相类似，即，BzdSI基因可能对于家蚕拥 有某种性别表型是必不可少的。