人类肿瘤发生候选基因LASS5的克隆及其相互作用蛋白鉴定

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:exiaodong1986
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肿瘤严重危害着人类的身心健康,研究表明,肿瘤发生相关基因在时空上的表达紊乱可导致肿瘤的发生。鉴定与肿瘤发生相关的基因及其分子途径,对于从分子水平认识肿瘤发生的机制和肿瘤的治疗均具有重要的意义。为了鉴定与肿瘤发生相关的基因,本研究从Hela cDNA文库中克隆了一个人类基因LASS5。LASS5位于12号染色体上,编码一个含HOX结构域和TLC结构域的蛋白质。研究发现LASS家族基因从果蝇到哺乳动物之间都具有高度的保守性,说明此蛋白所在的家族可能具有相当重要的功能。通过酵母双杂交实验,我们筛选到一个与LASS5相互作用的候选蛋白SDHB,SDHB为一介导呼吸链生物功能和调控细胞生长的相关蛋白。Co-IP及Pull down分析结果进一步证明,LASS5和SDHB无论是体内还是体外都存在着较强的相互作用。亚细胞共定位分析表明这两个蛋白在细胞质发生相互作用。与正常组织比较分析表明,LASS5和SDHB在肿瘤组织中的表达量均大幅上调。在HEK293细胞中过表达LASS5或SDHB蛋白均可以显著抑制MAPK信号途径下游转录因子p53和p21的转录激活。综合目前的研究结果来看,LASS5有可能通过参与MAPK信号途径调控细胞生命活动从而引起肿瘤发生。此外,作者在读期间还进行了一些其他研究工作。例如,为了利用酵母双杂交技术进行GGAP1基因的功能研究而构建了pGBKT7-GGAP1重组质粒;成功构建了hole转基因小鼠重组质粒以便利用转基因小鼠进行hole基因的功能研究;针对一骨胳石化症家系,运用PCR扩增和测序分析等技术对骨质代谢候选基因ClCN7的25个外显子及其与内含子交界区进行了突变检测,除了多态现象外未发现碱基突变,证实该基因不是该家系患者的致病基因。
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