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本研究分别在体外和体内评价了金刚烷胺、利巴韦林单独使用或联合使用抗禽流感病毒A/chicken/Hebei/China/2000(H9N2)(AIV-H9N2)的效果,旨在为临床治疗禽流感病毒感染合理用药提供科学依据。
1、体外试验:采用细胞病变法和MTT法分别测定金刚烷胺和利巴韦林对MDCK细胞的最大无毒浓度(TC<,0>);在药物无毒范围内,采用空斑形成试验(PFU)比较金刚烷胺、利巴韦林两种抗病毒药物在同一浓度下单独使用和联合使用对AIV-H9N2在MDCK细胞上增值的抑制作用。结果表明,金刚烷胺和利巴韦林的TC<,0>分别为51.3 μg/mL和218.5μg/mL:两种药物联合使用对AIV-H9N2的抑制作用显著高于两种药物单独使用的效果(P<0.01),当金刚烷胺和利巴韦林分别以0.39μg/mL和6.25μg/mL联合使用时,空斑抑制率达98%。联合用药时,完全抑制空斑形成所需药物浓度是金刚烷胺(12.5μg/mL)和利巴韦林(50μg/mL)单独使用的1/32和1/8。提示在体外金刚烷胺、利巴韦林联合使用具有协同抗AIV-H9N2的作用。
2、休内试验,取6周龄清洁级KM小鼠35只,随机分成5组,每组7只:①金刚烷胺用药组(500μg/只/天)灌胃给药,②利巴韦林用药组(500μg/只/天)滴鼻给药,③金刚烷胺和利巴韦林联合用药组(两种药物分别为500μg/只/天),④攻毒对照组,⑤正常对照组。前4组小鼠首先朋100 MID<,50>的AIV-H9N2 100μl/只滴鼻攻毒,攻毒前4小时首次给药,每只50μl(250μg),2次/天,连续用药5天。对照组以等体积的生理盐水灌胃。观察14天,每天测其体重、饲料消耗等作为临床指标;分别在攻毒后第3、5天每组各剖杀2只小鼠取肺脏用鸡胚分离病毒。结果表明,单独用药组小鼠体重增长曲线和攻毒小鼠相似,攻毒后3~5天明显下降,以后缓慢增加;联合用药小鼠体重增长速度明显高于单独用药小鼠(P<0.01),与正常对照小鼠相同,一直呈增加趋势。攻毒对照和利巴韦林组小鼠肺脏均能分出病毒,金刚烷胺和联合用药组均未分出病毒。提示金刚烷胺和利巴韦林联合使用在体内对也具有协同抗AIV-H9N2作用。综上所述,金刚烷胺和利巴韦林联合使用在体内、体外均具有协同抗AIV-H9N2的效果。