【摘 要】
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盐胁迫是影响植物生长和作物产量的主要非生物胁迫因子之一。CBL-CIPK信号调控网络在植物胁迫响应中扮演着重要角色。近年来,西北地区生态环境日益恶化。因此,改善我国西北盐
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盐胁迫是影响植物生长和作物产量的主要非生物胁迫因子之一。CBL-CIPK信号调控网络在植物胁迫响应中扮演着重要角色。近年来,西北地区生态环境日益恶化。因此,改善我国西北盐碱地区生态环境迫在眉睫。小美旱杨具有耐旱、抗腐烂、材质优良等特性,适应于华北及西北地区栽培。但小美旱杨耐盐碱能力有限,这对于西北盐碱地区的生态造林是一个重大的瓶颈问题。筛选抗盐候选基因及培育抗盐植株对改善西北盐碱地生态环境具有重要意义。小美旱杨组织培养体系研究较少,本研究通过茎段直接诱导腋芽及3种不同外植体诱导不定芽建立组织培养体系,以期为小美旱杨抗盐品种选育奠定基础;同时为了筛选耐盐候选基因,本研究对毛果杨CIPK基因家族生物信息学及小美旱杨CIPK基因家族盐胁迫响应进行分析。主要研究结果如下:1.本研究对CIPK基因家族的理化性质、系统发育、基因结构、顺式元件分析,鉴定出31个毛果杨CIPK基因,并按染色体的位置分别命名为PtCIPK1-PtCIPK31;理化性质分析表明:毛果杨CIPK基因家族氨基酸序列大小在396至549个氨基酸之间,蛋白分子量约为44.62-61.40kD,具有高等电点(PI>7.0);基因结构分析表明:毛果杨CIPK基因家族总体可分为有内含子及无内含子两大类,其中有内含子包括富含内含子和单个内含子两部分。启动子顺式元件分析表明:毛果杨CIPK基因家族含有多种非生物胁迫元件,同时也为后续基因功能的研究奠定了基础。2.基于生物信息学分析,本研究以小美旱杨为研究对象,探讨CIPK基因家族对盐胁迫响应,为后续品种改良奠定基础。qRT-PCR结果分析表明:当根部受到200 mMNaC1处理12h时,部分小美旱杨CIPK基因表达量上调;小美旱杨CIPK21/22/27可作为耐盐候选基因。小美旱杨CIPK基因家族的盐胁迫表达分析为毛果杨CIPK基因家族的进一步功能研究奠定基础。3.本研究通过茎段直接诱导腋芽及3种不同的外植体诱导不定芽建立小美旱杨组织培养体系,试验结果如下:(1)小美旱杨直接诱导腋芽最佳的消毒方法为75%的乙醇消毒30s,0.1%升汞消毒15min;茎段诱导腋芽最佳培养基为1/2MS;小美旱杨诱导腋芽最佳激素配比为:1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.03mg/LNAA;小美旱杨(茎段诱导腋芽方式)增殖培养基为1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L GA3。(2)小美旱杨叶片、茎段、叶柄最佳消毒方式为2%NaCIO消毒8 min;叶片诱导不定芽的最佳激素配比为MS+0.3 mg/L TDZ+0.3 mg/L IBA;小美旱杨茎段诱导愈伤的最佳激素配比为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA,分化最佳激素配比为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA;小美旱杨叶柄诱导愈伤的最佳激素配比为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,分化最佳激素配比为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LIBA。不定芽生根最佳激素配比为 1/2MS+0.3 mg/LIBA+0.08 mg/LNAA。
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