禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的禽类毁灭性疾病。高致病性禽流感被国际兽医局(OIE)定为A类传染病。该病自1878年首次报道以来，世界上许多国家和地区均有发生，AI不仅给世界养禽业造成了巨大的经济损失，而且对人类健康和生命安全构成了严重威胁。特别是禽流感病毒H5N1亚型于1997年、H9N2亚型于1999年、H7N7亚型于2003年和H5N1亚型于2004年先后发生感染人的事件，使得人们更加关注禽流感的公共卫生意义。 AIV呈球型，有囊膜。其表面有2种糖蛋白，其中之一是血凝素(HA)蛋白，主要作用是结合宿主唾液酸之类受体，能诱导产生中和抗体，是AIV的主要保护性抗原。 本研究对禽流感分离株H5N2的血凝素(HA)基因进行扩增、克隆、序列测定及比较分析；同时构建了真核表达质粒pVAX1-HA，并在Chicken embryo fibroblast(CEF)细胞中进行了表达；用重组质粒进行了动物保护性试验。为禽流感的防治提供科学的试验数据。 根据Genebank数据库中H5N1亚型禽流感病毒的HA基因序列，设计合成一对特异性引物，运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从H5N2亚型禽流感病毒分离株的尿囊液中扩增HA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T载体，转化到感受态大肠杆菌JM109中，经酶切和PCR鉴定正确后，重组质粒命名为pMD18-T-HA。将阳性克隆重组质粒pMD18-T-HA进行核苷酸序列的测定、同源性比较、HA基因系统发育进化树分析和氨基酸编码分析。结果表明，克隆到的HA基因全长1695bp，包括全部开放阅读框架，编码564个氨基酸。分离株与H5N1亚型禽流感病毒的HA基因同源性较高，在94％以上。推导氨基酸的序列分析表明，其HA蛋白裂解位点仅包含1个碱性氨基酸残基，符合低致病力AIV的基因特征。 将克隆质粒pMD18-T-HA中的HA基因序列亚克隆至真核表达载体pVAX1中。用限制性内切酶HindIII和XhoI进行双酶切和PCR鉴定，证实成功的构建了真核表达重组质粒pVAX1-HA，以质脂体介导法将其转染至CEF单层细胞中，通过荧光抗体技术和RT-PCR技术证实目的基因在动物细胞中获得了表达。此后进行了动物保护性试验，以50μg重组质粒对3周龄SPF雏鸡进行免疫，同时设置生理盐水和灭活疫苗对照组，加强免疫一次后进行病毒攻击，结果鸡群获得了90％的保护率。