论文部分内容阅读
电化学免疫分析法由于仪器设备简单,分析速度快,灵敏度高,线性范围宽等优点,越来越受到科研工作者的广泛关注。本论文研制了基于聚硫堇戊二醛自组装蛋白质的新体系,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体,使用双抗体央心法对甲胎蛋白(AFP)的进行检测。此外,在光照情况下,加入二茂铁,使之与聚硫堇一纳米金.抗体修饰电极发生光诱导反应,制成一种新型的光电免疫传感器,并考察了该传感器的工作条件及其的响应性能。在最佳实验条件下,分别测定了甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的线性范围及检测限。结果表明,该方法灵敏度高,分析快速、简便,在生物分析中具有广阔的应用前景。本文主要丌展了以下儿个方面的工作:一、基于电聚合硫堇膜的伏安型酶联免疫新体系的研究及应用将硫堇电聚合到铂电极表面形成聚硫堇膜,通过戊二醛自组装蛋白质,使酶标抗体与相应的抗原发生免疫反应时催化底物氧化聚硫堇,以聚硫堇膜电极的还原电流表达抗原的量,从而制得高灵敏度的甲胎蛋白免疫传感器。通过循环伏安法及差分脉冲伏安法考察了电极表面的电化学行为,并对免疫传感器的性能进行了详细研究。在优化的实验条件下,伏安法检测甲胎蛋白的线性范围为5.00-200 ng·mL-1,线性相关系数为0.9957,检测限为3.70 ng·mL-1。将该免疫传感器用于血清样品中AFP的检测,结果满意。二、基于电聚合硫堇膜光电效应的新型免疫传感器的研制在铂电极表面,通过聚合物膜大量的氨基活性基团,可以有效吸附纳米金,进而固定蛋白质,在底液中加入二茂铁,利用了修饰电极表面聚合物膜与二茂铁的光电效应,以聚硫堇膜电极的氧化电流表达抗原的量,从而制得高灵敏度的光电免疫传感器。同时,通过循环伏安法和电流一时间曲线考察了电极表面的电化学行为,并对光电免疫传感器的工作条件和响应性能进行了详细研究。这种传感器制作简单,而且在无酶的实验条件下,方法新颖,有一定的医学研究和临床检验研究价值。三、基于电聚合硫堇膜光电效应的新型免疫传感器的应用将该免疫传感器应用于甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的免疫分析并对实际样品的进行检测,结果令人满意。在优化的实验条件下,光电法检测甲胎蛋白的线性范围为5.00～ng·mL-1,其氧化峰电流的增餐和浓度的线性方程为:v=0.1152 x-21.82,线性相关系数为O.9951,榆测限为2.67 ng·mL-1。检测癌胚抗原的线性范围为5.00-80.0 ng·mL-1,其氧化峰电流的增量和浓度的线性方程为:v=0.1464 x-14.86,线性相关系数为0.9978,检测限为3.26 ng·mL-1。