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棉铃虫是一种重要的农业害虫,对粮食作物及纤维作物具有较大危害。人工合成拟除虫菊酯及有机磷杀虫剂在国内已经有30多年的使用历史,其被广泛应用在棉铃虫的防治上。目前,由于拟除虫菊酯类杀虫剂的大量使用,使得多数农业害虫都对其产生了抗药性,其中棉铃虫表现的更为严重。
不管是哺乳动物还是昆虫,拟除虫菊酯作用的最重要的分子靶标都是电压门控性钠通道。作为神经毒素的拟除虫菊酯通过改变通道的门控动力学特性,打乱了正常细胞之间的信号传递。
利用全细胞膜片钳技术研究分析七氟菊酯tefluthrin和溴氰菊酯deltamethrin对棉铃虫神经细胞钠通道的影响。结果显示,棉铃虫神经细胞钠通道在膜电位去极化至-45 mV时开始激活,峰值电位为-5 mV。钠通道稳态失活不完全,在去极化电位-20 mV到0 mV之间有一小的抵抗钠电流失活的电流成分(约占钠电流总电流的5%)。
Tefluthrin作用之后,导致被修饰的钠通道和未经修饰的钠通道开放共同产生了一个混合的电流成分。未被修饰的钠通道正常激活或失活;而被tefluthrin修饰的钠通道的激活、失活和去激活变得很慢,在去极化的过程中产生了慢激活、慢失活的电流,并在复极化时产生了慢衰减的尾电流。Deltamethrin未表现出这种现象。利用tefluthrin使钠通道的激活电压依赖性向超极化方向转移的性质,将膜电位去极化至-45 mV可以分离tefluthrin依赖性的电流成分。
Tefluthrin和deltamethrin都能使通道的激活和稳态失活向超极化方向转移,且具有浓度依赖性。当向浴液中施加10μM tefluthrin后,峰值电位向超极化方向移动到了-10 mV,但是使晚钠电流的峰值电位向超极化方向移动到了-15 mV。同时10μM tefluthrin也引起稳态失活向超极化方向移动了约10 mV。另外,在去极化预刺激后,两种拟除虫菊酯均使抵抗钠电流失活的电流增大,且对tefluthrin来说,这种电流增大具有浓度依赖性。当施加100μM tefluthrin后,抵抗电流由对照时的占钠电流总电流的5%增大至33%。
通过在0 mV、宽度5 ms、频率20 Hz的连续去极化预刺激之后,给予细胞以0 mV的测试脉冲刺激,检测tefluthrin对钠通道修饰的使用依赖性,我们发现tefluthrin对钠通道的修饰作用并没有使用依赖性。也就是说tefluthrin作用于棉铃虫神经细胞钠通道的静息状态。
本研究证明了tefluthrin和deltamethrin都能使通道的激活和稳态失活向超极化方向移动,且具有浓度依赖性。Tefluthrin对静息状态下的钠通道的修饰作用明显要强于deltamethrin对钠通道的作用。