猪胚胎体外培养影响因素的研究

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本研究以孤雌激活胚胎为研究对象,对猪胚胎体外培养过程中的相关影响因素进行了探讨。体外成熟的猪卵母细胞经孤雌激活后,用添加0.5%BSA的NCSU-23培养的囊胚率(36.7%)极显著高于添加5%,10%和15%FCS的NCSU-23(11.8%,18.5%和10.3%,P<0.01)。在NCSU-23中添加一定比例的TCM-199(10%,25%和50%),虽然对猪卵母细胞孤雌激活后的分裂率无显著影响(89.6%vs87.0%,83.4%和82.6%,P>0.05),但囊胚发育率随着TCM199比例的增加而显著下降(30.1%vs25.0%,11.1%和1.1%,P<0.05)。将NCSU23中的亚牛磺酸浓度从原来的5mmol/L降低到2.5,1.0或0.5mmol/L时,对猪卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率均无显著影响(P>0.05),但完全去掉亚牛磺酸则导致囊胚发育率极显著下降(1.4%)。在猪卵母细胞激活后的0~60h添加0.34mmol/L丙酮酸钠和5.4mmol/L乳酸钠,显著提高卵母细胞的分裂率(71.0%vs 63.9%,P<0.05),但60h后在培养液中添加丙酮酸钠和乳酸钠则极显著降低其囊胚发育率(3.0,6.3,3.3%vs20.2%,P<0.01)。从胚胎培养开始就添加葡萄糖可提高胚胎的囊胚发育率(20.1%vs10.3%,P<0.05)。在NCSU-23中添加12mmol/L的山梨醇,孤雌激活胚胎的囊胚发育率有所提高(32.4%vs26.0%),但差异不显著(P=0.1875)。 以上结果表明:(1)BSA的猪胚胎体外培养效果优于FCS;(2)猪胚胎的体外培养不需要成分复杂的培养液;(3)亚牛磺酸是猪胚胎培养液必不可少的重要成分,但其浓度可下调到现行的1/10;(4)乳酸盐和丙酮酸盐对猪胚胎的早期发育有促进作用,但不利于后期发育;葡萄糖对猪胚胎的整个培养发育过程均有促进作用。(5)山梨醇对猪胚胎的体外发育可能具有促进作用,但其效果有待进一步验证。
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