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绝大多数陆生植物地上部分的表面覆盖着一层类似白霜状的蜡质。表层蜡质具有很多生理生化功能,被视为植物对干旱胁迫做出的一种适应性响应。深入理解其生理生化特性对于植物生物学研究具有非常重要的现实意义。本研究中我们对小麦表皮蜡质相关基因进行了遗传分析和分子标记定位,并克隆了几个蜡质相关cDNA,得到了如下结果:
1 对两个蜡质分离群体F<,2:3>家系的F<,3>个体进行了离体叶片失水率的测定,结果发现有蜡小麦叶片离体后的失水速度均低于无蜡小麦叶片。由于所用实验材料为来源于同一个F<,2>单株的F<,3>分离个体,除了蜡质性状的差别以外其他性状基本一致,因此认为表皮蜡质是造成有蜡小麦叶片离体后失水速度低于无蜡叶片的原因,即表皮蜡质的存在可以减缓小麦叶片水分的丢失。
2 采用扫描电镜对杂交组合9753×3672的F<,3>代有蜡、无蜡植株的叶片和叶鞘进行了观察。结果发现:有蜡亲本9753和有蜡F<,3>个体叶鞘和叶片的表面覆盖着大量类似细管状或细杆状的蜡质晶体,而无蜡亲本3672和无蜡F<,3>个体叶片和叶鞘表面完全没有蜡质。
3 对9753×3672杂交组合的108个F<,2:3>家系考察蜡质性状并进行了遗传分析,结果发现表皮无蜡质性状由一个显性单基因控制,将该基因命名为IW3672。采用BSA法分析,从近2000对SSR引物中筛选到了5个与IW3672基因连锁的分子标记。应用Mapmaker3.0软件进行了连锁分析,结果表明这五个标记与.IW3672基因的连锁顺序为Xbarc124-IW3672-Xcau96-Xcfd51- Xgdm5-Xgdm35,遗传距离间隔分别为0.9 cM、1.4 cM、0.9 cM、7.2 cM和2.6cM。根据分子标记在中国春缺体-四体系、双端体系和缺失系材料上的定位结果,我们推断IW3672基因位于小麦2D染色体短臂的末端。
对5027×Hubel2467杂交组合的96个F<,2>单株考察蜡质性状并进行遗传分析后发现,表皮蜡质性状由一个显性单基因控制,将该基因命名为W2467。采用BSA法分析,从近2000对SSR引物中只筛选到了1个与W2467基因连锁的分子标记Xksm27-360/450。应用Mapmaker3.0软件进行了连锁分析,结果表明标记Xksm27-360/450与W2467基因的连锁距离为28cM。中国春缺体-四体系和双端体系定位结果显示,W2467基因位于小麦2D染色体。
4 利用小麦-水稻比较基因组方法,结合变性PAGE和PCR-SSCP分析筛选到了与IW3672基因连锁的2个EST标记Xwe6-2090bp/2140bp和Xte6-430bp以及一个SNP标记Xwe7-1920bp,与IW3672基因的遗传距离分别为0.9cM,1.9cM和4.3cM。
经过对比后发现,这三个EST衍生的标记与其对应的水稻4号染色体BAC克隆的排列顺序完全一致,表明在该区段小麦和水稻具有良好的微共线性,这为IW3672基因的图位克隆奠定了基础。
5 利用其它物种中已经克隆到的表皮蜡质相关基因的序列信息,通过电子克隆的方法获得了大麦非特异脂转运蛋白基因LTP7a2b和玉米Glossy8基因在小麦中的同源cDNA序列。生物信息学分析结果显示获得的两条小麦同源cDNA序列均具有可能参与蜡质合成或运输的功能结构域。利用Realtime-PCR进行表达分析后发现这两条小麦同源cDNA在有蜡材料中的表达量明显高于无蜡材料,我们推测这两个基因可能参与了小麦表皮蜡质的合成或运输。