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目的： 大肠癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤之一，目前各种治疗方法均不能有效地防止其转移和复发，其中最主要的原因是肿瘤组织的凋亡水平下调，从而逃避机体的免疫监视，免遭免疫系统的杀伤和攻击。因此进一步阐释肿瘤的免疫逃逸机制，寻找新的治疗靶点，已成为当今国内外肿瘤治疗的研究热点。本论文聚焦于Fas受体凋亡途径中的抑制蛋白——FLIP，采用RNA干扰技术，比较干扰前后体外培养的大肠癌细胞株凋亡敏感性的变化，阐明在大肠癌中是否存在由FLIP介导的免疫逃逸机制，并为肿瘤的基因治疗提供新的思路。 方法： 体外培养大肠癌细胞株，采用直接免疫荧光流式细胞学技术和半定量RT-PCR法筛选体外实验模型。利用电穿孔，将干扰性小RNA(siRNA)片段转染至HT-29细胞，以相对半定量PCR法计算干扰效率，确定FLIP基因被封阻情况。在激活型抗Fas抗体诱导下，采用Annexin V法和细胞周期分析共同判定转染前后HT-29细胞凋亡敏感性的变化。 结果： 1．综合Fas和FLIP两项指标的测定结果，筛选出HT-29细胞为适宜的体外实验模型(其Fas的表达水平为42.46％，c-FLIP_L mRNA的相对含量为83.36％)。 2．在摸索到的最佳电穿孔条件下(90mOsmol／kg低渗环境，电压500V，时程70μs，外源片段浓度100nM，室温)，将对应目的基因FLIP的siRNA转染入HT-29细胞，FLIP mRNA的相对含量由78.55％下降到27.48％，干扰效率达65.02％。 3．在激活型抗Fas抗体的刺激下，转染后的HT-29细胞凋亡比例由1.76％上升到29.5％，细胞周期分布图上出现“凋亡峰”。 天津医科大学硕士学位论文中文摘要结论:1.大肠癌细胞中存在一定水平的FLIP表达，经RNA干扰后，FUPm丑NA表 达水平下调，细胞表面Fas受体表达水平未产生明显变化，细胞对Fas介导 的凋亡敏感性上升，从而证实在大肠癌中存在着由FLIP介导的免疫逃逸机 制。2.随着FLIP表达水平的下降，在激活型抗Fas抗体的刺激下，大肠癌细胞中 凋亡细胞所占比例增加，提示FLIP作为受体凋亡通路的关键因子，可望成 为肿瘤基因治疗的新靶点。3.将对应目的基因FLIP的外源siRNA片段转染入体外培养细胞后，高效、特 异地降低了FLIP mRNA的表达，并进而阐明FLIP的生物学功能，提示RNA 干扰作为一种新型基因研究手段拥有较广阔的应用前景。