【摘 要】
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利用本实验室已构建好的干扰人端粒酶hTERT的shRNA体内表达载体(PGCsi-hTERT),观察沉默乳腺癌MCF-7细胞中hTERT基因对细胞基质金属蛋白酶-2的影响,为以端粒酶为靶点的肿瘤治
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利用本实验室已构建好的干扰人端粒酶hTERT的shRNA体内表达载体(PGCsi-hTERT),观察沉默乳腺癌MCF-7细胞中hTERT基因对细胞基质金属蛋白酶-2的影响,为以端粒酶为靶点的肿瘤治疗学研究提供理依据。将PGCsi-hTERT表达载体通过LipofectamineTM 2000脂质体转染试转染MCF-7细胞, G418选择性筛选培养,得到稳定抗药的细胞克隆。该稳定细胞克隆再经hTERT RT-PCR半定量检测mRNA和TRAP-ELISA检测端粒酶活性,证明该稳定抗药的细胞克隆具有明显的hTERT沉默效果,表明已成功获得沉默hTERT稳定转染的MCF-7阳性克隆。进一步通过RT-PCR半定量检测和明胶酶谱分析观察沉默hTERT后对细胞MMP-2的影响,结果显示稳定抑制端粒酶活性的MCF-7细胞克隆,MMP-2 mRNA的相对表达量没有变化;同时明胶酶谱检测酶原型MMP-2的分泌明显减少,提示端粒酶可能在参与调节MMP-2翻译过程中起作用,其确切作用机制好有待于进一步明确和探讨。
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