IL-1β诱导下人牙龈成纤维细胞表达EGFR的研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:honghui2009
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目的:①建立体外人牙龈成纤维细胞模型,为进一步研究提供实验基础。②观察牙龈成纤维细胞在不同浓度IL-1β干预人后EGFR的表达状况,进一步明确EGFR在牙周病发生发展过程中提供理论依据。方法:①首先对人的牙龈成纤维细胞依次分离和培养利用的是原代组织块方法,其次观察人的牙龈成纤维细胞的生物学特性,绘制其生长曲线并观察其增值的规律,最后确定来源,免疫组织化学方法对其进行抗角蛋白和抗波形丝蛋白抗体鉴定,从而成功建立起人的牙龈成纤维细胞体外的模型。②利用培养成功的5~8代人的牙龈成纤维细胞,制取爬片,分别以Ong/ml、0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的IL-1β浓度来干预人的牙龈成纤维细胞,在24h后采用免疫组织化学方法检测EGFR在各组干预浓度细胞中的表达,并观察人的牙龈成纤维细胞在形态学上的变化,最后利用医学图像分析系统对结果来数据分析和图像分析,用单因素方差分析法,人牙龈成纤维细胞经IL-1β干预后EGFR在细胞中的表达进行统计分析。结果:①培养人牙龈成纤维细胞利用原代组织块培养法,和体外人牙龈成纤维细胞模型的成功建立,细胞在倒置显微镜下观察呈现长梭形或星形,在光镜下观察免疫组织化学染色细胞抗角蛋白抗体阴性,而抗波形丝蛋白抗体阳性,从而证明有成纤维样细胞特性并且源自中胚层的;传代培养,5~8代细胞活力良好,形态规则且增殖速度较快,但8代后细胞增值速度减慢且出现衰老凋亡迹象。②人牙龈成纤维细胞经IL-1β24h干预后用免疫组织化学方法检测EGFR在细胞中的在蛋白水平上表达结果表明:对照组中EGFR在人的牙龈成纤维细胞中呈阴性表达,人的牙龈成纤维细胞经IL-1β干预后EGFR在细胞中呈阳性表达。人牙龈成纤维细胞经IL-1β干预后EGFR在细胞中的表达特征表明,在0.1ng/ml-10ng/ml浓度内EGFR的表达出递增的趋势是随着IL-1β干预浓度的升高,IL-1β对细胞干预后,在低浓度时细胞形态没有明显变化,在高浓度干预时,细胞核变大星形细胞所占比例增高,但在0.1ng/ml-10ng/ml浓度内未见细胞有衰老和凋亡现象。结论:①建立起人牙龈成纤维细胞的体外模型是利用了原代组织块法,此法容易操作且成活率高,并且良好地反映细胞的生物学特性;5~8代细胞形态功能稳定适于进行实验研究,而8代后细胞成稳定性下降,从而成活率下降不适合进行实验研究。②在IL-1β干预后人的牙龈成纤维细胞中的表达EGFR结果提示,EGFR参与了牙周炎症的发生发展,并且在牙周炎进程中起着重要的调控作用。
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