灰霉菌是一种具有广泛非特异性寄主的死体营养型真菌,可侵染1000多种植物,对农作物生产和采后贮藏造成重大损失,被认为是十大病原真菌之一。灰霉菌和核盘菌在系统发育上具有高度的同源性,是研究腐生真菌的模式物种。灰霉菌可以通过分泌大量的胞外蛋白,在侵染植物的过程中发挥重要作用。但是到目前为止,仍有许多分泌蛋白的功能和作用机制是未知的。因此对灰霉菌分泌蛋白开展相关研究,对进一步揭示灰霉菌致病机制和与寄主植物的互作关系具有重要意义。本课题组在之前的研究中发现核盘菌中编码1个假定分泌蛋白的SS1G₀8163基因在抑制植物防御反应和促进核盘菌侵染植物方面具有一定的作用。因此我们猜想灰霉菌中与核盘菌SS1G₀8163同源的基因是否也参与到植物-灰霉菌的互作过程。通过氨基酸序列比对,我们鉴定出了2个同源基因:BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100,它们与SS1G₀8163分别具有50.00%和60.87%的同源性。利用同源重组技术,我们分别对BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100进行基因敲除,验证得到了5个BCIN₀4g00360缺失突变体和4个BCIN₀9g07100缺失突变体。与野生型B05.10相比,ΔBCIN₀4g00360和ΔBCIN₀9g07100的菌丝生长正常,对番茄叶片的致病性无显著性差异。我们将BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100分别构建到含有GFP标签的植物病毒表达载体,通过荧光显微镜观察发现它们定位在烟草细胞的细胞膜上。此外,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达实验测定BCIN₀4g00360和BCIN₀9g071002对植物细胞的死亡调节活性,发现它们均不能引起烟草过敏性反应,也不能抑制由激发子INF1诱导的植物防卫反应。本研究结果表明,BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100的缺失并不影响灰霉菌的生长和致病,这可能跟灰霉菌分泌蛋白的功能冗余性有关,其它具有相似功能的基因弥补了基因缺失的影响。根据亚细胞定位结果,我们推测这2个假定分泌蛋白可能在植物细胞膜上发挥一定的功能。BCIN₀4g00360和BCIN₀9g07100无法诱导植物细胞死亡和抑制植物防卫反应,可以初步推断它们在植物-灰霉菌互作中不具有特定功能。但是这可能跟分泌蛋白在烟草中的瞬时表达量不高或者不参与由INF1引发的免疫反应传导通路有关,相关实验还有待进一步进行。