论文部分内容阅读
1,8-桉叶油素（1,8-cineole）是一种单萜类化合物,是植物精油——桉油中的主要活性成分。实验室前期研究表明1,8-桉叶油素对浅表皮肤真菌具有抑制作用,对由真菌引起的皮肤疾病具有较好的疗效。但1,8-桉叶油素作为局部用药,存在易挥发,不易在皮肤层停留等缺点,因此,本研究拟通过将1,8-桉叶油素制备成纳米乳凝胶剂,提高其水溶性,增加1,8-桉叶油素在皮肤内的药物含量,主要研究内容及结果如下:1.1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的制备及其体外抗真菌活性评价1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的制备主要包括纳米乳的优化和凝胶基质的筛选。首先,采用伪三元相图和响应面法筛选纳米乳的最优处方;然后,再以凝胶基质的外观性状、黏度、涂展性、均匀度和分层情况为考察指标,筛选加入纳米乳中的最佳凝胶基质及其浓度;最后,按照最优处方得到1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂,并采用二倍微量稀释法检测其对须癣毛癣菌、犬小孢子菌和石膏样小孢子菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果显示:○1 1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的最优处方及其制备工艺为:称取1.5 g CMC-Na加入8 m L甘油、0.02 g Na2EDTA、0.2 g尼泊金乙酯和12 m L去离子水后,静置24 h使其充分溶胀,备用;取EL-35 10.08 m L与无水乙醇2.52 m L混合均匀得到混合液Smix,再取1,8-桉叶油素12.1 g,加入上述混合液Smix中,搅拌均匀;然后利用水滴定法缓慢地向上述混合液中加入去离子水至80 m L,滴加过程中须不停搅拌,得到澄清透明的1,8-桉叶油素纳米乳;最后将溶胀好的凝胶基质倒入1,8-桉叶油素纳米乳中充分搅拌得1,8-桉叶油素纳米乳凝胶。○2 1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂对须癣毛癣菌、石膏样小孢子菌和犬小孢子菌具有良好的抑制作用,其MIC值分别为12.5μL/m L、25μL/m L和12.5μL/m L,MFC值均为25μL/m L。2.1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的表征及透皮性能评价参照《中国药典》2020版四部中的相关检测要求,对1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂进行表征检测。检查项目包括纳米乳凝胶剂的外观形状、微观形态观察、p H值、黏度、保湿率、粒径、zeta电位、分散项系数、检查,鉴别,含量检测以及稳定性考察等。为研究其透皮性能,还采用Franz扩散池结合高效液相色谱法对其药物单位面积累积透过量和药物单位面积沉积量进行检测,再使用Origin软件对其渗透曲线进行拟合,并采集涂抹1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂、1,8-桉叶油素纳米乳和1,8-桉叶油素的各大鼠背部皮肤进行HE染色,观察其皮肤结构的完整性。结果显示:○1 1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂符合纳米制剂和凝胶制剂的相关质量标准。○2 1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂分别在高温、高湿,强光照条件下,储存10d,其稳定性表现良好;在加速试验条件下（30℃±2℃、相对湿度65%±5%）,储存6个月和在长期试验条件下（25℃±2℃、相对湿度60%±5%）,储存12个月,其稳定性良好。○3在体外透皮性能评价中,1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的稳态期流量最小,其渗透曲线符合一级动力学模型;经检测,1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂在皮肤内的药物沉积量最高,而且对大鼠皮肤层完整性的破坏程度最轻微。3.1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的皮肤毒性评价按照《兽药研究技术指导原则汇编》和《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》要求,对1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂进行皮肤毒性评价。结果显示:○1 1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂经皮LD50为大于5000 mg/kg,按照药物毒性分类标准,1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂属于无毒类药物。○2在皮肤刺激性试验中,涂抹1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂后,完整皮肤组试验兔皮肤未出现异常现象,无刺激性。而破损皮肤组在涂抹1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂开始时,个别试验兔皮肤出现轻微红斑,但72 h后红斑消失,表明1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂对试验兔无皮肤刺激性。○3在皮肤过敏性试验中,涂抹1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂后,试验兔皮肤均未出现异常现象,1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂在72 h内对试验兔皮肤无致敏性。○4在眼部刺激性试验中,涂敷1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂的眼睛开始时角膜出现轻微的充血和眼睑水肿现象,但24 h内便恢复正常,该结果表明1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂对眼睛无刺激现象。综上所述,本研究对制备的1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂进行了表征分析、体外抗真菌活性评价、透皮性能评价及皮肤毒性评价。以上结果表明,1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂是一种带淡蓝色乳光的澄清半透明的半固体,其黏度、p H值、保湿率、粒径、zeta电位、多分散项系数、水茴香烃、鉴别、含量检测和稳定性检测均符合2020版《中国药典》中的相关标准;1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂与1,8-桉叶油素相比,其对三种皮肤癣菌的抗菌活性提升;纳米乳凝胶剂的制备增加了1,8-桉叶油素在皮肤中的沉积量,改变了其渗透规律;经皮肤毒性评价后得到1,8-桉叶油素纳米乳凝胶剂无皮肤毒性、刺激性和过敏性。