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帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种神经退行性疾病,主要病因是黑质中多巴胺（dopamine,DA）能神经元发生进行性变性缺失和路易小体（Lewy Body,LB）形成。神经炎症是诱导PD发病的重要因素,研究表明,在α-突触核蛋白（α-synuclein）异常聚积和神经元变性的过程中,小胶质细胞过度激活,导致小胶质细胞动态表型失衡,从而加剧神经炎症反应,促进PD的进展。因此有效调控小胶质细胞的表型状态有助于减缓PD的发病进程。近些年的研究报道,内源性大麻素系统在神经退行性疾病中发挥神经保护作用。其中,大麻素Ⅱ型受体（cannabinoid type 2 receptor,CB2R）主要是在小胶质细胞上表达。激活CB2R可以抑制小胶质细胞的过度激活,减少炎症因子的释放,从而改善PD的神经炎症。在出血性脑病的研究中,激活CB2R正是通过调节小胶质细胞的M1/M2表型变化来减轻脑损伤。另有研究表明,CB2R对神经炎症的抑制作用是与磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）通路和核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）信号通路相关。此外,研究证实Nrf2也是参与调控小胶质细胞表型转化的重要因素之一。本课题组前期研究发现CB2R的激活可以抑制1-甲基-4-苯基吡啶阳离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+）诱发星形胶质细胞的神经炎症。因此,我们推测激活CB2R可能促进MPP+诱导的小胶质细胞由M1型转化为M2型,并且这一效应可能与激活PI3K/Akt/Nrf2通路相关。本实验使用原代培养的大鼠小胶质细胞作为研究对象,使用CB2R激动剂JWH133和CB2R拮抗剂AM630对培养的小胶质细胞进行预处理,随后加入MPP+处理,应用免疫印迹法对各组小胶质细胞不同表型的标志物诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）、精氨酸酶-1（agrinase-1,Arg-1）和白细胞介素-10（interleukin 6,IL-10）的蛋白表达水平进行检测;应用流式细胞术来检测各组小胶质细胞不同表型的表面标志物CD86和CD206的表达水平;应用免疫印迹法检测各组小胶质细胞的PI3K和Akt的磷酸化水平和总蛋白的表达以及Nrf2蛋白的表达;使用相关通路蛋白抑制剂对小胶质细胞进行预处理,应用免疫印迹法检测各组小胶质细胞Akt的磷酸化蛋白和总蛋白、Nrf2、i NOS和Arg-1蛋白的表达水平。实验结果如下:1.应用免疫荧光法,使用CD11b和Hochest双染检测原代小胶质细胞纯度。原代小胶质细胞CD11b的阳性率平均为93%。2.应用免疫印迹法,我们对各组小胶质细胞M1标志物i NOS和IL-6蛋白的表达进行了检测。与对照组相比,MPP+处理细胞后诱导i NOS和IL-6蛋白表达增加（P＜0.0001,P＜0.001）;与MPP+组相比,JWH133预处理组i NOS和IL-6蛋白表达下降（P＜0.001）;和JWH133预处理组比较,AM630与JWH133共处理组的i NOS和IL-6蛋白表达水平升高,JWH133的作用被AM630逆转（P＜0.05）。3.应用免疫印迹法,我们对各组小胶质细胞M2标志物Arg-1和IL-10蛋白的表达进行了检测。与MPP+组相比,JWH133预处理后Arg-1和IL-10的蛋白表达增加（P＜0.001）;与JWH133预处理组相比,与AM630共处理组的Arg-1和IL-10蛋白表达下降（P＜0.05）。4.应用流式细胞术,我们检测了各组小胶质细胞M1表面标志物CD86和M2表面标志物CD206的表达。与对照组相比,MPP+处理的小胶质细胞中CD86的表达明显增加（P＜0.001）;与MPP+处理组相比,JWH133显著抑制了CD86的表达（P＜0.001）;JWH133和AM630的共同处理增强了CD86的表达（P＜0.05,与JWH133预处理组相比）。与MPP+组相比,JWH133预处理促进小胶质细胞CD206的表达（P＜0.001）;与AM630共处理可以逆转JWH133的效果（P＜0.05,与JWH133预处理组相比）。5.应用免疫印迹法,我们对各组小胶质细胞PI3K和Akt的磷酸化蛋白和总蛋白以及Nrf2蛋白的表达进行了检测。和对照组比较,MPP+处理组的PI3K和Akt的磷酸化蛋白以及Nrf2蛋白表达降低（P＜0.05）;与MPP+组相比,JWH133预处理组的PI3K和Akt的磷酸化蛋白以及Nrf2蛋白表达升高（P＜0.001）,该结果可被AM630阻断（P＜0.05,与JWH133预处理组相比）。加入PI3K抑制剂处理小胶质细胞,应用免疫印迹法检测各组细胞Akt的磷酸化蛋白和总蛋白以及Nrf2蛋白的表达。与JWH133预处理组相比,JWH133和PI3K抑制剂共同加药抑制了Akt磷酸化和Nrf2蛋白的表达（P＜0.05）。6.应用免疫印迹法,我们检测了加入Nrf2抑制剂预处理细胞后的i NOS和Arg-1蛋白表达。与JWH133预处理组相比,和Nrf2抑制剂共同处理组的i NOS蛋白表达升高（P＜0.05）。此外,Nrf2抑制剂阻断了JWH133促进Arg-1蛋白的上调（P＜0.05）。以上结果证实,JWH133可以抑制MPP+诱导的M1型小胶质细胞标志物i NOS、IL-6和CD86的蛋白表达,并且增加M2型小胶质细胞标志物Arg-1、IL-10和CD206的蛋白表达,提示JWH133激活CB2R促进MPP+诱导的小胶质细胞由M1型转变为M2型。JWH133促进PI3K和Akt的磷酸化蛋白和Nrf2的蛋白表达,并且该结果可被PI3K抑制剂阻断,提示CB2R可激活小胶质细胞的PI3K/Akt/Nrf2信号通路。Nrf2抑制剂逆转了JWH133对i NOS的抑制作用和对Arg-1的促进作用,提示激活CB2R调节小胶质细胞表型转化的作用与激活PI3K/Akt/Nrf2通路相关。