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目的:涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC),是一种涎腺恶性肿瘤。其特点是恶性程度高,侵袭性强,易复发、易早期转移,且对放疗、化疗不敏感,手术治疗难以根除。因此,寻求有效的辅助性治疗手段非常必要。肿瘤基因治疗已成为最引人瞩目的研究领域,是继手术、放疗、化疗之后的又一种治疗模式。本研究采用RNA干扰技术阻断凋亡抑制因子Survivin在腺样囊性癌细胞中的表达,观察其对于ACC细胞生物学行为的影响,并对其作用机制作初步探讨。方法:本实验针对Survivin mRNA设计和构建特异性的siRNA重组干扰质粒;采用脂质体介导法转染人腺样囊性癌细胞株ACC-2,以Western Blot和RT-PCR法检测Survivin siRNA对ACC-2细胞Survivin和Caspase-3表达的变化;并应用MTT法检测稳定转染的ACC-2细胞株增殖的变化;采用透射电镜技术、TUNEL法和流式细胞技术检测细胞凋亡,观察细胞超微结构改变以及细胞周期的变化。结果:1、经上海生工生物工程技术有限公司测序,成功获得重组克隆测序结果,结果表明,成功构建靶点特异性的Survivin siRNA重组质粒。2、以DOTAP脂质体介导法将Survivin siRNA转染人腺样囊性癌细胞株ACC-2。在荧光显微镜下观察细胞,成功转染的细胞通常因为共同表达的绿色荧光蛋白从而发绿色荧光。经过G418的筛选后,获得稳定转染siSurvivin质粒的ACC-2细胞克隆。3、细胞内Survivin蛋白及mRNA表达相对水平是非处理组的35%和27%;Survivin表达显著降低。4、细胞内Caspase-3蛋白及mRNA表达相对水平是非处理组的189%和134%,Caspase-3表达明显增多。5、MTT实验提示:随着培养时间的延长,Survivin基因沉默组的OD值较对照组明显降低,细胞增殖明显受抑制。6、透射电镜观察可见Survivin基因沉默组ACC细胞超微结构呈凋亡样改变,出现线粒体肿胀及细胞浆浓缩特征性表现。7、TUNEL检测发现Survivin基因沉默组呈棕黄色染色的凋亡细胞较对照组有明显增多。8、流式细胞仪检测细胞周期,细胞在G1期比例明显增多,而在G2/M期有所减少。结论:1、siRNA重组干扰质粒转染能够高效地抑制ACC-2细胞株Survivin mRNA和蛋白的表达,并成功筛选出最有效沉默Survivin表达的siSurvivin-2。2、靶向Survivin基因RNA干扰能有效抑制腺样囊性癌细胞的增殖。3、靶向Survivin基因RNA干扰能有效促进腺样囊性癌细胞的凋亡。4、激发Caspase-3的活性是靶向Survivin基因RNA干扰促进腺样囊性癌细胞凋亡的关键因素之一。