子痫前期与CTGF基因启动子甲基化水平的相关性分析

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研究目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是一种十分常见的产科疾病,具有妊娠期特发的特点,可导致母体多个系统不可逆性的损害及胎儿生长受限,该病的发病机制一直是产科研究的热点。近几年来,表观遗传学在子痫前期发病的研究中一直处于上升趋势,并且更多的研究是关于DNA的甲基化。结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF/CCN2)属于CNN家族,是非常重要的血管调节生长因子,主要具有促进细胞分化、粘附、趋化、迁移和凋亡及促进细胞外基质重塑等生物学功能,参与机体多种病理生理过程。因此本文旨在检测子痫前期孕妇外周血中结缔组织生长因子CTGF基因启动子的甲基化水平,检测子痫前期患者胎盘组织中CTGF mRNA及蛋白的定位与表达,探讨CTGF在子痫前期PE发生、发展中的作用。研究方法:收集90名子痫前期病人(子痫前期PE组)和94名正常妊娠孕妇(正常对照CTL组)的外周血样本,采用甲基化特异性PCR(Methylation Specific PCR,MS-PCR/MSP)技术对两组CTGF基因启动子甲基化水平进行检测,对比分析两组实验结果。同时采集18例子痫前期病人和18例正常妊娠孕妇的胎盘样本,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)技术检测两组胎盘组织中CTGF mRNA的表达;采用Western Blot实验技术检测两组胎盘组织中CTGF蛋白的表达;采用免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)观察两组胎盘组织中CTGF的表达分布。结果:子痫前期PE组和正常对照CTL组CTGF基因启动子甲基化阳性率分别是32.2%、46.8%,子痫前期PE组CTGF基因启动子甲基化水平低于正常对照CTL组,且两组间差异有统计学意义(?(17)=4.087,P<0.05)。实时荧光定量PCR实验结果显示:胎盘组织中PE组CTGF mRNA的表达(3.97±0.85)明显高于正常对照组(1.23±0.22),且两组差异具有统计学意义(t=3.103,P<0.05)。Western blot实验结果显示:在PE组和正常组胎盘组织中,CTGF蛋白相对表达水平分别为(1.60±0.08)、(1.37±0.31),两组间CTGF蛋白无统计学差异(t=0.73,P>0.05)。免疫组化结果显示,CTGF在PE病例组和正常对照组胎盘组织中均有表达,且主要在胎盘组织的滋养层细胞中表达,但两组间CTGF蛋白表达却无显著差异。结论:子痫前期患者外周血CTGF基因启动子异常低甲基化;子痫前期患者胎盘组织中CTGF mRNA的表达水平较正常孕妇显著提高;子痫前期患者胎盘组织中CTGF蛋白的表达却与正常孕妇无明显差异。我们据此推测子痫前期疾病的发生很可能与CTGF基因启动子异常的低甲基化水平有关,提示CTGF可能是子痫前期疾病潜在的致病靶点,但子痫前期中CTGF甲基化具体的调控方式还需实验进一步研究。
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