【摘 要】
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目的:细胞层面探讨了自噬对支气管上皮细胞NMU-ILC2s调节的影响。构建动物哮喘模型,并探讨了针刺对自噬介导的NMU-ILC2s免疫调节的影响。方法:（1）BEAS-2B细胞分为CON组、RAPA组、3MA组,其中CON组不做任何处理,RAPA组和3MA组分别使用自噬抑制剂3MA和自噬激动剂Rapamycin干预36小时,采用Western blot检测自噬及NMU-ILC2s免疫相关蛋白。采用
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目的:细胞层面探讨了自噬对支气管上皮细胞NMU-ILC2s调节的影响。构建动物哮喘模型,并探讨了针刺对自噬介导的NMU-ILC2s免疫调节的影响。方法:（1）BEAS-2B细胞分为CON组、RAPA组、3MA组,其中CON组不做任何处理,RAPA组和3MA组分别使用自噬抑制剂3MA和自噬激动剂Rapamycin干预36小时,采用Western blot检测自噬及NMU-ILC2s免疫相关蛋白。采用RT-PCR检测NMUR1、RORα基因表达。收集细胞培养液,采用ELISA检测细胞因子IL-4和IL-13表达。（2）30只雌性C57小鼠随机分为5组:CON组（CON）、气道高反应组（AHR）、针刺组（ACU）、自噬抑制剂组（3MA）及阳性对照组（DM）。采用腹腔注射OVA+HDM联合致敏构建哮喘模型,ACU组进行肺俞、大椎及足三里针刺治疗,3MA组和DM组分别进行腹腔注射3MA和地塞米松。于末次致敏24小时内进行气道阻力检测。采用HE染色进行肺组织病理检测。采用Western blot检测NMU-ILC2s及自噬相关蛋白,RT-PCR检测NMU、NMUR1、RORα基因。收集外周血及肺泡灌洗液进行细胞因子检测。结果:（1）与CON组对比,RAPA组NMU、NMUR1和RORα蛋白表达增加（P<0.05）,3MA组相关蛋白表达下调（P<0.05）。NMUR1、RORα基因表达与蛋白表达一致。RAPA组2型细胞因子IL-4和IL-13表达增加（P<0.05）,3MA组表达显著下降（P<0.05）。（2）AHR组小鼠肺阻力增加百分比高于CON组（P<0.05）。与AHR组相比,ACU组、3MA组及DM组气道阻力增加百分比均下降（P<0.05）,其中3MA组降低最明显。（3）HE染色结果显示,CON组小鼠支气管上皮细胞排列整齐,管腔内外无炎细胞浸润;AHR组小鼠支气管管壁增厚,结构不完整,管腔狭窄,腔内可见大量渗出物,周围大量炎细胞浸润;ACU组小鼠支气管结构趋于完整,管壁厚度较AHR组薄,管腔内渗出物减少,炎细胞浸润减少;3MA组小鼠支气管结构完整,上皮细胞排列完整,管腔内无渗出物,周围少量炎细胞浸润;DM组小鼠支气管管壁变薄,管腔内渗出物减少,周围炎细胞浸润减少。（4）ACU组及3MA组自噬相关蛋白LC3、ATG5、P62表达低于AHR组（P<0.05）,DM组自噬蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。对比AHR组,ACU组及3MA组NMU、NMUR1、RORα蛋白表达下调（P<0.05）,DM组蛋白表达差异无统计学差异（P>0.05）。NMU-ILC2s相关基因表达与蛋白一致。（5）与CON组相比,AHR组小鼠外周血和肺泡灌洗液中IL-4和IL-13表达均显著升高（P<0.05）;与AHR组对比,ACU组IL-4和IL-13表达降低（P<0.05）。结论:自噬增强可以促进NMU-ILC2s免疫,抑制自噬可以抑制NMU-ILC2s相关蛋白及基因的表达,从而减少2型细胞因子的分泌。针刺通过抑制自噬来抑制NMU-ILC2s相关蛋白及基因表达,减少2型细胞因子的分泌,从而缓解哮喘模型小鼠气道高反应及气道炎症状态。
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