胃腺癌细胞中E-cadherin表达调控机制的研究

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目的:研究上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)在正常的胃粘膜上皮细胞、正常的支气管粘膜上皮细胞、胃腺癌细胞和肺腺癌细胞中的表达情况及其差异,并探讨此种差异的内在机制。方法:第一部分是选取正常的胃粘膜上皮细胞(GES-1细胞)、正常的支气管粘膜上皮细胞(HBE细胞)、胃腺癌细胞(SGC-790、MGC-803和BGC-823细胞)和肺腺癌细胞(A549细胞)作为研究对象,提取各细胞株总RNA采用RT-PCR技术检测E-cadherin在mRNA水平的表达情况;提取各细胞株总蛋白采用免疫印迹(WesternBlot)技术检测E-cadherin在蛋白水平的表达情况。第二部分是抽提各细胞株DNA,采用MSP(甲基化特异性PCR)和BSP(亚硫酸氢盐修饰后测序PCR)来检测各细胞株E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化水平。第三部分是使用转甲基酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)作用于各细胞株72h后应用RT-PCR技术检测各细胞株中E-cadherin表达水平的变化以进一步探究E-cadherin表达与甲基化之间的关系。结果:1.E-cadherin仅在HBE细胞中表达,在其余各细胞中不表达。2.MSP和BSP显示四种肿瘤细胞的E-cadherin基因启动子区的CpG岛均存在高甲基化,而GES-1和HBE两种正常的上皮粘膜细胞中则几乎不存在甲基化。3转甲基酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-Azacytidine)能够使各肿瘤细胞株中E-cadherin在mRNA水平上恢复表达,但不能使GES-1细胞中E-cadherin恢复表达,亦不能使HBE细胞中E-cadherin表达增加。结论:E-cadherin的表达水平与E-cadherin基因启动子区的甲基化水平都存在密切的关系。四种肿瘤细胞中E-cadherin的缺失可能与其基因启动子区的高甲基化有关。而GES-1细胞中E-cadherin的缺失则与甲基化无关,缺失的原因需要进一步研究。亚硫酸氢盐修饰后PCR(BSP)联合TA克隆测序可以对肿瘤细胞某基因启动子区CpG岛的甲基化水平进行精确量化。
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