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目的:本研究旨在构建mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒,考察其形态、粒径、包封率、载药量等理化特性;体外干预喉癌Hep-2细胞,MTT法观察其对喉癌细胞的杀伤作用,为喉癌生物治疗的临床转化奠定基础。方法:1、设计3条Bmi-1 shRNA和1条NC序列,分别与PCO24-pGenesil-1质粒连接构建3组Bmi-1RNAi重组质粒和1组无效重组质粒,并测序鉴定;2、通过RT-qPCR的方法检测重组干扰质粒转染293T细胞后,Bmi-1基因的表达情况,并筛选出干扰效果最佳的干扰质粒。3、采用透析法制备mPEG-CS纳米载体,进行核磁共振氢谱表征(~1H-NMR)分析,琼脂糖凝胶电泳考察其DNA保护作用、基因包裹能力,MTT法考察其细胞毒性;4、采用超声振荡和简单络合的方法合成mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒,考察其形态、粒径和Zeta电位,计算包封率和载药量;5、MTT实验分为4组:PTX、mPEG-CS/PTX、mPEG-CS-cRGD/PTX和mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX组,分别考察各组纳米制剂24h和48h对Hep-2细胞的活性及增殖的影响,探讨其对喉癌细胞的杀伤作用。结果:1、基因测序结果表明Bmi-1shRNA成功插入PCO24-pGenesil-1质粒载体中,RT-qPCR实验证实3条干扰质粒均可有效抑制Bmi-1基因的表达,Bmi-1的相对表达量分别为0.118±0.003、0.124±0.017、0.172±0.007;2、核磁共振氢谱表征(~1H-NMR)分析结果表明CS和mPEG成功连接构成纳米载体mPEG-CS,MTT实验结果显示制备的mPEG-CS载体的细胞毒性不随载体浓度增加而增加,具有低细胞毒性,琼脂糖凝胶电泳结果显示载体和基因的w/w比值为10:1时,基因被mPEG-CS载体完全包裹,w/w比值为24:1时,基因被完全保护;3、制备的最佳投料比的mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒形态规整、近似球形,粒径为182±30.6nm,Zeta电位为10.14±0.52mV,包封率84.84%,载药量4.24%。MTT实验结果表明:mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX组较其他各组对喉癌Hep-2细胞杀伤作用强,且存在时间和浓度依赖关系。结论:成功构建Bmi-1RNAi重组干扰质粒、mPEG-CS纳米载体和mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒。其中Bmi-1RNAi质粒干扰效果明显,mPEG-CS纳米载体具有良好的生物相容性和安全性,mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX纳米缓释微粒对喉癌Hep-2细胞杀伤效果明显,是理想的靶向药物。