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目的《2018中国心血管病报告》指出心血管病占居民疾病死亡构成的40%以上,成为我国居民的首位死因。心血管疾病已经成为重大的公共卫生问题,防治心血管病刻不容缓。冠心病(coronary artery disease,CAD)是一种十分常见的心血管疾病,目前,临床上以脂蛋白-胆固醇含量作为CAD的预测因子。然而最近研究发现,血清中脂蛋白-胆固醇含量处于正常值时,仍然具有发生CAD的风险,因此单纯从血清脂蛋白-胆固醇含量的角度评价CAD及事件发生概率具有一定局限性。深入研究后发现,载脂蛋白与CAD的发生发展紧密相关,尤其是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)携带的载脂蛋白A1和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)携带的载脂蛋白B。本实验通过对CAD患者血清中的脂蛋白进行分离表征,探究CAD患者血清中HDL和LDL含量值的变化,尝试寻找新型的CAD预测因子。方法1.本实验采用非对称场流分离技术(asymmetrical field flow-field fractionation,AF4)联用紫外可见光检测器(UV/Vis)对CAD患者血清中的脂蛋白进行分离表征。样品的分析结果受系统分离条件影响,本课题从进样量、交叉流流速、载液离子强度、膜类型、垫片厚度等几个方面考察了AF4系统条件对样品分析结果的影响,并验证实验结果的重复性,保证系统的适用性。2.为了消除AF4分离过程中,血清样品中游离蛋白质对脂蛋白分析结果的干扰,本课题选择使用苏丹黑B(Sudan Black B,SBB)对血清中脂蛋白进行特异性染色,在特定检测波长范围下,探究SBB与脂蛋白的染色程度对分析表征结果的影响。同时,为了减小样品在过滤膜上的吸附,提高回收率分离度,本课题从交叉流流速、载液离子强度两个方面展开研究,以确定样品的最佳分离条件。并在最优分离条件下,对CAD患者与健康人的血清样品进行了AF4-UV/Vis分析。结果通过考察系统分析条件,确定最佳分离条件为交叉流流速V_c=2 mL/min,载液离子强度I为100 mM NaCl。在此条件下进行实验结果的重复性考察(n=5),实验结果证明AF4分析血清脂蛋白的重复性良好,证明此方法的稳定性较好;通过AF4-UV/Vis对SBB染色的血清脂蛋白进行分离表征,结果发现,健康人血清中LDL和HDL含量与CAD患者存在一定差异。结论本课题证明AF4可以实现血清中高、低密度脂蛋白的基线分离。此外,实验结果证明,相比于LDL,HDL的含量变化更易受到冠心病的影响。