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目的1.回顾性分析HBV在不孕夫妇中感染率,以初步评估HBV对感染者生育能力的影响。2.探讨HBV感染对IVF-ET妊娠结局的影响。3.检测男方为HBV携带者不孕夫妇废弃胚胎是否存在HBV,以评估HBV经精子垂直传播的风险。4.检测女方为HBV携带者不孕夫妇卵母细胞及废弃胚胎是否存在HBV,以明确HBV在IVF/ICSI、胚胎冷冻或赠卵中经卵母细胞和胚胎传播的风险。5.定量检测女性HBV携带者血液及其卵泡液HBV DNA水平,分析二者的相关性。6.比较IVF周期与ICSI周期感染HBV的不孕夫妇卵母细胞及废弃胚胎HBV阳性率,以探讨ICSI周期HBV传播风险是否增加。7.研究卵母细胞及废弃胚胎HBV阳性率与血清标志物的关系,并探讨ART是否增加HBV垂直传播的风险。方法1.回顾性分析2008年1月至2008年12月在同济医院生殖中心行IVF/ICSI治疗的3457对不孕夫妇中,女方HBsAg阳性率、男方HBsAg阳性率和夫妻双方HBsAg阳性率。2.2009年3月至2009年12月收集HBV感染组研究对象共244对夫妇,包括男方为HBV携带者不孕夫妇130对、女方为HBV携带者不孕夫妇102对和夫妻双方均为HBV携带者不孕夫妇12对。对照组为2009年3月至2009年12月在同济医院生殖中心行IVF/ICSI治疗的未感染HBV的不孕夫妇。比较男方为HBV携带者不孕夫妇、女方为HBV携带者不孕夫妇、夫妻双方均为HBV携带者不孕夫妇与对照组未感染HBV不孕夫妇的一般情况、超促排卵结果、胚胎着床率、流产率和临床妊娠率。3.采用PCR法检测男方为HBV携带者不孕夫妇废弃胚胎的HBV DNA, RT-PCR法检测男方为HBV携带者不孕夫妇废弃胚胎的HBV RNA。4.采用PCR法检测女方为HBV携带者不孕夫妇未受精卵母细胞和废弃胚胎的HBV DNA, RT-PCR法检测女方为HBV携带者不孕夫妇未受精卵母细胞和废弃胚胎的HBV RNA,免疫荧光法研究包含HBsAg的病毒颗粒在卵母细胞和胚胎的位置。5.实时荧光定量PCR法检测女性HBV携带者血液及其卵泡液HBV DNA水平,Spearman’s相关系数评估二者的相关性。6.在检测上述不孕夫妇未受精卵母细胞和/或废弃胚胎基础上,比较IVF周期与ICSI周期感染HBV的不孕夫妇卵母细胞及废弃胚胎HBV阳性率。7.采用放射免疫法检测HBV感染标志物。结果1.在接受ART治疗的不孕夫妇中,女方HBsAg阳性率为7.95%(275/3457),男方HBsAg阳性率为12.61%(436/3457),夫妻双方HBsAg均阳性占1.19%(41/3457),HBV总的感染率为21.75%(752/3457)。2.HBV感染组和对照组一般情况与超促排卵结果相似。女方为HBV携带者的夫妇着床率、生化妊娠率和临床妊娠率分别为19.9%、11.76%、30.39%,与对照组着床率(23.39%)、生化妊娠率(7.46%)和临床妊娠率(33.56%)无显著性差异；男方为HBV携带者的夫妇着床率为17.17%,显著低于对照组组着床率23.39%,男方为HBV携带者的夫妇生化妊娠率和临床妊娠率分别为6.15%和34.62%,与对照组生化妊娠率(7.46%)和临床妊娠率(33.56%)无显著性差异；夫妻双方均为HBV携带者的夫妇着床率、生化妊娠率和临床妊娠率分别为13.04%、0和25%,与对照组着床率(23.39%)、生化妊娠率(7.46%)临床妊娠率(33.56%)无显著性差异。3.18对男方为HBV慢性携带者不孕夫妇的84个废弃胚胎行PCR法检测,结果3对(16.7%)夫妇废弃胚胎阳性；13对男方为HBV慢性携带者不孕夫妇的52个废弃胚胎行RT-PCR检测,结果9对(69.2%)夫妇废弃胚胎阳性。4.14对女方为HBV慢性携带者不孕夫妇的71个未受精卵母细胞、废弃胚胎行PCR法检测,结果3对(21.4%)夫妇未受精卵母细胞、废弃胚胎阳性；17对女方为HBV慢性携带者不孕夫妇的63个未受精卵母细胞、废弃胚胎行RT-PCR检测,结果8对(47.1%)夫妇未受精卵母细胞、废弃胚胎阳性；10对女方为HBV携带者夫妇的20个未受精卵母细胞及废弃胚胎行免疫荧光检测,6对夫妇的未受精卵母细胞及废弃胚胎的细胞浆、细胞核处可见散在的绿色荧光信号。5.实时荧光定量PCR法检测31位女性HBV携带者血液及其30份卵泡液HBV DNA水平,结果女性HBV携带者血液HBV DNA水平与卵泡液HBV DNA水平不相关(r=0.13,P=0.48)。6.31对男方为HBV携带者夫妇中,5对夫妇行ICSI,26对夫妇行IVF,废弃胚胎HBV DNA/RNA阳性率分别为40%(2/5)和38%(10/26)(P=1.00)。31对女方为HBV携带者夫妇中,8对夫妇行ICSI,23对夫妇行IVF,胚胎和卵母细胞HBV DNA/RNA阳性率分别为13%(1/8)和43%(10/23),无统计学差异(P=0.20)。7.HBsAg阳性母亲新生儿的未受精卵母细胞和废弃胚胎的阳性率为7.7%,HBsAg和HBeAg/HBV DNA双阳性母亲未受精卵母细胞和废弃胚胎的阳性率介于50%-100%。结论1.不孕夫妇中HBV总的感染率为21.75%,高于一般人群8%-10%的HBV感染率,初步提示HBV可能影响感染者的生育能力。2.HBV感染可能不影响IVF-ET妊娠结局。3.人类精子可以作为载体将HBV传播给胚胎,并在胚胎复制和翻译,从而为"HBV可能经精子垂直感染胚胎"的假设提供了直接的证据。4.HBV也可以穿破人卵母细胞和胚胎的透明带,在卵母细胞和胚胎内复制和表达。5.血液HBV DNA水平与卵泡液HBV DNA水平、卵母细胞及胚胎HBV阳性率不相关,所有HBV携带者的卵泡液及其卵母细胞都可能携带病毒,具有传播HBV的风险。6.HBV携带者夫妇行ICSI并不增加其卵母细胞和胚胎HBV感染率。7.与自然妊娠相比,IVF可能不增加HBV的垂直传播风险。