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鸡新城疫(Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的鸡的一种急性、烈性、高度接触性传染病,是危害养禽业的最严重疫病之一。控制新城疫最根本的措施是进行有效的疫苗接种,目前常用的疫苗是弱毒活疫苗和灭活疫苗,但二者在实际应用中均存在一定的局限性。口服微球疫苗可以诱导较强的粘膜免疫;同时还能够诱导产生系统的体液免疫和细胞免疫,已成为ND疫苗研究的热点。本研究利用壳聚糖为囊材,新城疫病毒液为芯材,戊二醛为交联剂,选择适当的乳化体系,制备粒径小、分散性好的疫苗微球。结果显示,壳聚糖微球最佳合成条件:2.5%壳聚糖2%乙酸溶液,液体石蜡与壳聚糖溶液的体积比为2.5:1,吐温-80 8mL,戊二醛用量2mL,交联时间为1.5h,保持高速搅拌状态,即转速≥4000 r/min。在此最佳合成条件下,制得微球为黄褐色微粒,呈完整球形,表面光滑无明显孔洞,平均粒径为5.83μm。为了建立鸡淋巴细胞转化检测的MTT法,本研究对细胞浓度、刀豆蛋白A ConA浓度和培养时间3个参数进行了筛选。结果确定了MTT法检测SPF鸡淋巴细胞转化能力的最佳培养条件为:细胞浓度5×106个/mL在20μg/mLConA的RMPI1640完全培养基40℃培养56h。试验表明,该方法可用于鸡体外细胞免疫功能的检测。在以上研究基础之上,本研究对制备出的新城疫壳聚糖微球疫苗进行了实验室安全检验和效力检验。将新城疫壳聚糖微球疫苗与La Sota活疫苗和新城疫油乳剂灭活苗分别免疫SPF鸡,利用MTT法、血凝抑制法(HI)和ELISA等分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫抗体IgA,并在当免疫鸡HI抗体降到23的情况下进行了攻毒试验。结果表明,新城疫壳聚糖微球疫苗安全性好,免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫、体液免疫和局黏膜免疫,具有较好的保护作用,保护效力优于新城疫常规弱毒苗和灭活疫苗。