新型鸭呼肠孤病毒病是由新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）引起的一种鸭免疫抑制病,雏禽感染NDRV后出现精神沉郁,食欲不佳,伴有较高的死亡率,而成年水禽感染后没有明显症状,但病毒会持续侵害宿主的免疫系统,造成免疫抑制,进而容易出现继发感染。NDRV的感染宿主范围广,除感染樱桃谷鸭、半番鸭、麻鸭外、鹅也易感。该病目前在我国多个省市的地区广泛流行,给养殖业造成了巨大的经济损失。单克隆抗体对疾病的诊断和防治,以及病毒致病机制的研究等都具有重要意义。本实验将临床病例中分离到的NDRV流行株接种鸡肝癌细胞（Chicken hepatoma cells,LMH）进行增殖,通过超速离心后获得浓缩纯化的病毒作为抗原免疫BALB/c小鼠,三次免疫后对其血清效价进行间接酶联免疫吸附实验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测,然后选取血清效价最高的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合。融合细胞经ELISA和间接免疫荧光（Indirect immunofluorescence Assay,IFA）筛选和亚克隆后,最终获得了两株杂交瘤细胞3H11E5B8和3H11E5G8。将这两株杂交瘤细胞扩大培养,腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水。经过IFA鉴定,本实验获得的两株杂交瘤细胞分泌的抗体都可以有效识别NDRV的σC蛋白,两株单抗的亚型均为Ig Mκ型。我们进一步选用3H11E5G8株单抗初步建立了NDRV阻断ELISA方法,实验条件经过反复优化,最终确定为:抗原包被浓度5μg/m L,封闭液使用10%脱脂乳,阴、阳性血清稀释比例1:5,HRP酶标二抗稀释比例1:2,000,TMB底物显色时间10min。判定标准:当PI≥24.06%时,血清样品判定为NDRV抗体阳性,PI≤15.49%时判定为阴性,当PI介于15.49%到24.06%之间时,判为可疑。对建立的阻断ELISA进行特异性实验,结果显示,该检测方法仅对NDRV有较好的特异性,对鸭瘟病毒、鸭坦布苏病毒、1型和3型鸭肝炎病毒、H7禽流感病毒、H9禽流感病毒和新城疫病毒的阳性血清没有阻断效果。敏感性实验表明,当阳性血清稀释到400倍时,阻断率PI仍大于24.06%,说明该方法有良好的敏感性。使用该阻断ELISA方法对临床收集的部分血清样品进行检测,同时用IFA方法进行验证,结果阻断ELISA方法与IFA的检测结果一致,说明该阻断ELISA方法可适用于临床样品的检测。综上所述,本研究成功制备了靶向NDRVσC蛋白的单克隆抗体,并以此为基础初步建立了该病毒的阻断ELISA抗体检测方法,研究结果为NDRV商品化阻断ELISA抗体检测试剂盒的制备奠定了实验基础。