RNA干扰LMP1对瘤细胞化学药物敏感性的影响

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恶性肿瘤是威胁人类生命和健康的主要疾病。肿瘤细胞的耐药性是肿瘤化学药物治疗取得决定性突破的主要障碍,将化学药物治疗与基因靶向治疗技术联合利用,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性是目前研究的热点。本论文以猴淋巴瘤细胞B95.8细胞系为材料,利用RNA干扰(RNAi)技术沉默B95.8细胞中潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,从而探讨LMP1对肿瘤细胞化学药物敏感性的影响及其功能。研究结果如下:1.根据GenBank中LMP1(NC-007605)的序列,设计出两条特异干扰LMP1mRNA的小干扰RNA片段(siRNA)。用设计的siRNA转染B95.8细胞,然后分别应用RT-PCR和Western-Blot检测细胞的LMP1 mRNA和LMP1蛋白表达情况,结果显示被干扰细胞组比对照组在LMP1 mRNA表达水平和LMP1蛋白表达水平均明显降低,表明两条siRNA干扰序列均为有效片段,都成功抑制了B95.8细胞中LMP1的表达。2.利用流式细胞仪检测细胞周期,结果显示:被干扰细胞组的G0/G1期细胞比例比对照组高,而S+G2/M期比例比对照组低,表明RNA干扰阻滞了B95.8细胞由G0/G1期向S期的转化。3.药物作用实验结果显示:随化学药物顺铂浓度增加,细胞的存活率均呈下降趋势,具有明显的浓度-效应关系;且相同条件下,随作用时间的延长,细胞对顺铂的IC50值呈下降趋势,具有明显的时间依赖性。4.用四氮唑盐法(MTT法)检测细胞对顺铂的敏感性,结果显示:在相同条件下,顺铂对干扰组细胞的抑制率大于对照组细胞;干扰组细胞对顺铂的IC50值低于对照组细胞,且具有显著差异。表明抑制LMP1的表达提高了B95.8细胞对顺铂的敏感性。
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