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本实验于2002年10月至2004年3月在华中农业大学国家果树脱毒种质资源室内保存中心进行,取带毒和健康的不同柑橘品种的茎尖为试材,进行微芽嫁接。并对带毒材料和嫁接成活植株进行聚合酶链式反应(PCR)、直接荧光检测。为果树脱毒中心建立了柑橘茎尖嫁接获得无病毒苗木的培养体系。主要的结果如下: 1.通过改进的方法提高了茎尖嫁接成活率,“⊥”法最高的成活率只有37.5%,而改进方法的最高成活率为75%。 2.用不同浓度的6—BA对茎尖进行不同时间的处理,不同的品种对6—BA的效果不一致。发现1mg/L的6-BA浸泡茎尖10min有利于提高5个品种的嫁接成活率,较高的可达75%。 3.用不同浓度的GA3对茎尖进行不同时间的处理,不同的品种对GA3的效果不一致。发现2mg/L的GA3浸泡茎尖20min时有利于提高3个品种的嫁接成活率,较高的成活率为62.5%。 4.根据黄龙病病原的核苷酸序列设计PCR引物。脱毒前利用PCR对感病的红江橙、宫川和纽荷尔进行检测。结果红江橙、宫川和纽荷尔都扩增到特异性电泳区带, 这与设计的扩增片断一致,证明是感染黄龙病病原的植株。 5.感染黄龙病的植株筛管细胞中异常荧光是由一群坏死细胞引起的,用直接荧光法作为检测的辅助方法。在荧光显微镜下观察到病株韧皮部有黄绿色荧光团块。 6.对嫁接成活苗进行了PCR、直接荧光法检测,都未检测到黄龙病的病原,说明茎尖嫁接脱除黄龙病病原是有效的,所得到的成活苗都是不带黄龙病的健康植株。可以为无病毒苗木的繁殖提供健康的接穗材料。