目的:第一部分将通过优化前哨淋巴结术中印片细胞学检测的方法,以提高前哨淋巴结活检术中病理学评估手段的灵敏度与准确性,减少术中检测假阴性的发生率,节约医疗资源与成本。第二部分将在术后同时利用免疫组化染色、逆转录聚合酶链反应以及流式细胞术检测前哨淋巴结内微转移情况,通过这三种方法分别与金标准的比较以及其三者间的比较,筛选出最佳的微转移检测技术,建立最佳的术后前哨淋巴结微转移评估的流程。方法:第一部分:前哨淋巴结术中印片细胞学检测的优化从2005年02月至2008年02月,有366例患者进入本研究,其术中所获取的前哨淋巴结采用传统的印片制片方式,即沿前哨淋巴结的长轴,间隔2.0～3.0毫米进行切割;从2008年03月至2009年01月,有122例患者参与本研究,其术中所获取的前哨淋巴结采用新的印片制片方法进行,即利用我们自行设计制造的前哨淋巴结切割器沿前哨淋巴结的短轴,间隔1.5毫米进行切割。连续切片H&E染色将作为术中病理学评估的金标准。第二部分:免疫组化染色、逆转录聚合酶反应以及流式细胞术在前哨淋巴结微转移检测中的应用自2008年03月至2009年03月,术中获取的前哨淋巴结应用前哨淋巴结切割器,间隔1.5mm进行切割,各切面进行印片后,将第3n-1片、第3n-2片以及第3n片分送不同的检测方法进行淋巴结病理学检测,其中第3n片送检连续切片H&E染色及免疫组化染色,第3n-1片送检逆转录-聚合酶链式反应检测,第3n-2片送检流式细胞术检测。结果第一部分:新的多切面印片细胞学检测的灵敏度、特异度以及准确性以病例数为计算单位分别为92.0%、99.0%以及97.5%,优于传统的印片制片方法。新的印片制片方法与传统的印片制片方法间对于宏转移的检出能力有显著差异(p=0.023)。导管内癌、导管内癌伴浸润以及浸润性导管癌以病例数为单位计算的淋巴结转移率分别为4.4%、12.5%以及31.3%。有97.7%的存在有前哨淋巴结转移的患者,其第一枚有转移的前哨淋巴结出现在术中所获取的前三枚前哨淋巴结中。第二部分:在所有的104枚前哨淋巴结中,连续切片H&E染色发现了11枚(10.6%)前哨淋巴结阳性,其中2枚(18.2%)前哨淋巴结为微转移。免疫组化染色证实这两枚前哨淋巴结为宏转移,并且进一步在H&E染色阴性的淋巴结中发现了11例微转移,1例宏转移。而RT-PCR以及流式细胞术分别在联合应用连续切片H&E染色和免疫组化染色均为阴性的淋巴结中检测出了5例(6.2%)与4例(4.9%)的淋巴结中存在有微小转移灶,其中有1例为RT-PCR与流式细胞术共同阳性。在所有的11例存在有微转移的前哨淋巴结中,有5枚前哨淋巴结,其患者同时存在有其他前哨淋巴结的转移。在免疫组化水平检测出的前哨淋巴结微转移,同一患者的其他淋巴结同时存在有转移的机会较前哨淋巴结阴性的患者高(p=0.007)。结论:第一部分:新的多切面印片细胞学检测方法优于传统的制片方法,尤其是在对于宏转移的检出能力上。只针对术中所获取的前三枚前哨淋巴结进行术中印片细胞学检测不会显著影响印片细胞学检测的准确性,还可降低病理科的工作负荷以及医疗成本。开放活检病理学诊断为单纯导管内癌的患者可以考虑省去术中前哨淋巴结病理学评估的步骤。第二部分:连续切片免疫组化染色的灵敏度高于H&E染色,RT-PCR与流式细胞术的灵敏度更高于免疫组化染色,但目前并不能证实由RT-PCR或流式细胞术所检出的转移灶是否为真阳性,故连续切片免疫组化染色仍建议为术后前哨淋巴结病理学检验的金标准,而由后两者所检出的患者需要进行密切的腋窝随访。免疫组化染色检验水平检出的前哨淋巴结中存在有微转移的患者,其他前哨淋巴结中同时存在有转移或微转移的可能性较高,所以建议术中前哨淋巴结活检术至少获取两枚前哨淋巴结,以提高准确性。