艾滋病（AIDS），是当今对人类健康威胁最大的疾病之一，自从引起艾滋病的HIV病毒被发现以来，科学家们始终致力于寻找科学有效的预防和治疗手段，但由于HIV本身高度变异性及易于产生耐药性的特点，至今仍然没有研制出治愈艾滋病的有效药物。从疾病控制长远战略来说，有效的HIV疫苗才是战胜HIV流行的最佳希望。本课题组前期进行了多载体HIV疫苗序贯及重复免疫的研究，接受免疫的动物体内可长期维持高水平细胞免疫反应。本研究主要对表达gag基因的重组腺病毒疫苗（Ad5-HIVgag）进行临床前药效学研究，为该疫苗的临床应用提供依据。腺病毒载体一直是基因治疗和疫苗研究的热点，这主要是由于腺病毒载体具有安全性高、宿主范围广泛、感染滴度高、稳定性好，腺病毒双链DNA基因组易于重组基因操作等特点。核心蛋白Gag具有较高的保守性，富含CTL表位，是细胞免疫应答的主要靶标。Ad5-HIVgag疫苗是插入了HIV-1gag基因的、缺失病毒E1及E3区的非复制型5型重组腺病毒。疫苗中gag基因来自HIV-1B亚型gag共享序列。本研究首先对Ad5-HIVgag疫苗检定的PCR方法、酶切方法、Western blot方法及ELISpot方法进行了方法学验证并制定了相应的质量检定规程。对纯化的三批重组Ad5-HIVgag疫苗制品进行了相应的质量检定。用PCR方法可以扩增出gag特异性产物，酶切方法证明HIV-1gag基因插入位置正确，Western blot方法证实Gag蛋白可以有效表达，免疫小鼠后用ELISpot方法可检测到Gag特异性细胞免疫反应。本研究重点评价了小鼠及猴体内的细胞免疫反应效果。用不同剂量的Ad5-HIVgag疫苗(2×10⁶VP/只/次、2×10⁷VP/只/次、2×10⁸VP/只/次、2×10⁹VP/只/次、2×10¹⁰VP/只/次)局部肌肉注射小鼠两次或三次，最后一次免疫后1周用ELISpot方法检测Gag特异性细胞免疫反应。结果2×10⁶VP的剂量就可以在小鼠体内获得明显的细胞免疫应答。以2×10⁷VP的剂量注射产生的细胞免疫反应水平最高，当高于此剂量时，细胞免疫水平反而降低。为观察Ad5-HIVgag疫苗在食蟹猴体内所引起的特异性免疫反应，在猴长毒试验过程中同时进行了药效学观察。分别使用低（0.99×1011VP/只/次）、中（4.94×1011VP/只/次）、高（24.68×1011VP/只/次）不同的病毒剂量，肌肉注射食蟹猴，于0、3、6、9、12周各肌肉注射1次。于不同时间点用ELISpot方法检测疫苗诱导的Gag特异性细胞免疫反应，同时也检测了动物血清抗腺病毒的中和抗体。结果从初次免疫后5周开始，免疫的动物即检测到了Gag特异性细胞免疫反应，随着时间的延长，8周时Gag特异性细胞免疫反应水平有增加。12周时Gag特异性细胞免疫反应水平有所下降，但随后15周及18周的检测，Gag特异性细胞免疫反应水平又有升高。说明，食蟹猴在一定的剂量范围内用Ad5-HIVgag免疫后，可产生针对Gag的特异性免疫反应。三个实验组动物都检测到了较高水平的腺病毒中和抗体，但是对Ad5疫苗反复应用诱导的Gag特异性细胞免疫反应抑制作用并不明显。总之，Ad5-HIVgag疫苗可以诱导机体产生Gag特异性T细胞应答，有可能成为治疗艾滋病的有效疫苗。依据国家对生物制品注册的管理规定，对Ad5-HIVgag疫苗相关的质量研究及药效学研究资料进行了整理，并已向北京市药品监督管理局递交了Ⅰ期临床研究申请。