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肿瘤标志物在肿瘤的临床诊断和治疗中占有重要地位，不仅可用于肿瘤普查、早期诊断、辅助诊断、良恶性鉴别和临床分期，同时对监测疗效、判断预后、预测肿瘤的复发和转移也具有重要价值。临床上常采用多种肿瘤标志物联合检测，应用多变量分析的方法来提高肿瘤诊断的阳性率和特异性。目前常用的血清肿瘤标志物检测方法包括放射免疫测定(RIA)、酶联免疫测定(ELISA)、化学发光免疫测定(CLIA)、时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)等，这些方法存在一个共同的局限性——每次仅能检测一种肿瘤标志物，因此检测多项指标时不仅将增加被检测者的经济负担，也使检测者耗费更多时间、精力和试剂。
液相芯片是基于美国Luminex公司xMAP(flexible Multi—Analyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台，它是在不同荧光编码的微球上进行抗原．抗体、酶一底物、配体．受体的结合反应及核酸杂交反应，通过红、绿两束激光分别检测微球编码和报告荧光信号来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应，是一种新一代高通量分子诊断技术平台。与其它免疫分析方法相比，液相芯片技术除了具有快速、灵敏、灵活、检测范围广等显著特点，其最突出优势还在于可以同时对同一样本中多种不同的目的分子进行定性和定量分析。
鉴于临床上联合分析多种肿瘤标志物的必要性以及目前检测手段的局限性，我们的研究目的是应用液相芯片技术开发出能够联合检测多种血清肿瘤标志物的新型免疫诊断试剂。
我们选择了数种临床上常用的肿瘤标志物——癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、总前列腺特异性抗原(tPSA)、神经原特异性烯醇化酶(NSE)以及乙肝表面抗原(ItBsAg)为待测物，根据双抗体夹心免疫分析原理研制了能同时定量测定其中3～4项指标(即CEA+AFP+HBsAg、CEA+AFP+tPSA、CEA+AFP+tPSA+NSE)的液相芯片检测试剂，评价了试剂的检测范围、最低检测限、精密度、正常参考值范围、稳定性、灵敏度、特异度、准确度等，并与化学发光免疫分析法(CLIA)和时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)进行了临床血清标本检测结果的相关性比较。
结果显示：
(1)、CEA+AFP+tBsAg：检测范围分别为0.016～400 ng/ml、0.013～166.4 ng/ml、0.26～1625 ng/ml：最低检测限分别为10.7 pg/ml、13.3 pg/ml、0.26ng/ml；批内精密度<9﹪，批间精密度<14﹪：测定100份临床血清标本的灵敏度为92﹪～98.2﹪，特异度为95.5﹪～100﹪，准确度为96﹪～97﹪；与CLIA测值的相关系数分别为0.936、0.962(指CEA、AFP，n=100)，与TRFIA的相关系数分别为0.937、0.972、0.918(n=100)。
(2)、CEA+AFP+tPSA(两步法)：检测范围分别为0.031～400 ng/ml、0.026～166.4ng/ml、0.008～40 ng/ml；最低检测限分别为31.3 pg/ml、13.0 pg/ml、5.2 pg/ml；批内精密度<10﹪，批间精密度<14﹪；测定100(109)份临床血清标本的灵敏度为96.2﹪～98.2﹪，特异度为97.7﹪～98.2﹪，准确度为97﹪～98﹪；与CLIA测值的相关系数分别为0.961、0.972(n=100)、0.962(n=109)，与TRFIA的相关系数分别为0.958、0.980(n=100)、0.955(n=109)。 (3)、CEA+AFP+tPSA+NSE：检测范围分别为0.039~400 ng/ml、O.030～121 ng/ml、0.007～30 ng/ml、0.146～300 ng/ml；最低检测限分别为26.0 pg/ml、19.7 pg/ml、4.9 pg/ml、73.2 pg/ml；批内精密度<9﹪，批间精密度<13﹪：与CLIA测值的相关系数分别为0.986、0.979(n=64)、0.964(n=60)、0.958(n=64)。
(4)、CEA+AFP+tPSA(一步法)：检测范围分别为0.031～400 ng/ml、O.052～200ng/ml、0.016～60 ng/ml；最低检测限分别为31.3 pg/ml、26.0 pg/ml、7.8 pg/ml；批内精密度<10﹪，批间精密度<14﹪；与CLIA测值的相关系数分别为0.920、0.923(n=30)、0.940(n=41)；与分步反应法的相关系数分别为0.963、0.952(n=30)、0.979(n=41)。
(5)、稳定性：将液相芯片试剂的主要组分——CEA抗体交联微球、抗原标准品和生物素标记抗体于37℃放置7天后，标准品荧光值有所下降，但标准曲线良好，检测范围无改变，3个阳性血清的测值与放置前接近，批内和批间CV仍低于10﹪。
我们的研究结果证明，液相芯片检测试剂可在2～3 h内联合定量测定1～2 μl人血清中的CEA、AFP、HBsAg、tPSA、NSE水平，该试剂操作简单、快速、灵活、灵敏度高(达到pg级)、重复性好(CV<14﹪)、检测范围广(3～5个数量级)，与采用CLIA、TRFIA方法所得测值的相关性良好，而且大大节省时间和标本用量，具有发展为用于健康体查、高危人群筛查、临床诊治等方面诊断试剂的潜力。本研究为进一步开发成熟的、临床用多肿瘤标志物液相芯片检测试剂奠定了坚实的基础。