N－末端乙酰化修饰是蛋白最主要的修饰方式之一,本文主要内容是研究乙酰化酶基因rimJ缺失对大肠杆菌BL21（DE3）生长的温度敏感性影响以及两种原核乙酰化酶RimJ和NAT的底物特性。一、通过设计长度为1000bp的同源臂构建打靶质粒,利用0.2%的L-阿拉伯糖诱导辅助质粒表达SceI归巢内切酶将打靶片段切下并在Red同源重组酶的作用下将打靶片段替代目标序列得到rimJ敲除菌。通过测定出发菌和敲除菌在不同温度下（25℃、37°C、42°C）的生长曲线,比较不同温度下的最大比生长速率,利用t值分析这两株菌的比生长速率,结果无显著差异；在高倍显微镜下观察两株菌在不同温度下的形态也无差异；同时将Tβ4融合蛋白分别在两株菌中表达,分析两株菌表达外源蛋白的能力。测定结果表明两株菌在三个温度下的最大比生长速率无显著性差异、不同温度下的菌体形态以及表达外源蛋白的能力基本无差异。说明rimJ基因的缺失对大肠杆菌E.coli BL21（DE3）菌株生长的温度敏感性没有影响。二、通过镍柱亲和层析、透析处理得到纯度大于90%的乙酰化酶RimJ和NAT,选择8种蛋白的N末端六肽为其作用底物,DTNB作为显色物质利用分光光度法检测两种酶分别作用的底物,测定其底物专一性；同时将RimJ和NAT分别与Tβ4融合蛋白、ESAT-6共表达,通过镍柱亲和层析、反向高效液相色谱技术得到高纯度的蛋白纯品,利用Q-ToF质谱技术得到共表达的Tβ4融合蛋白、ESAT-6的分子量。在412nm处检测,结果显示对照组吸光值均低于0.05,而RimJ可以乙酰化Tα1（0.274）、ESAT-6（0.132）、S5（0.177）三种六肽；另外一种NAT可以乙酰化Tal（0.214）、Tβ4（0.204）、ESAT-6（0.159）、S5（0.123）、S 18（0.148）、L12（0.218）、EF-Tu（0.125）七种六肽。RimJ和NAT都可以在体内将Tβ4融合蛋白乙酰化。两部分实验表明该乙酰化酶NAT具有更广泛的底物特性。