论文部分内容阅读
背景:结直肠腺癌(Colorectal adenocarcinoma,CRA)是一种常见的消化系统恶性肿瘤,随着我国生活习惯的变化,其发病率呈现上升趋势,多数患者发现时已属中晚期。但CRA目前临床主要采用手术并辅以化疗手段,治疗效果不佳。因此,对于结直肠恶性肿瘤早发现、早治疗是预防结直肠腺癌进展的重要途径。而恶性肿瘤的进展与肿瘤细胞间质降解密切相关。基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)与金属蛋白酶组织抑制剂-4(tissue inhibitor of metalloproteinase-4,TIMP-4)参与到肿瘤细胞间质降解过程中,在肿瘤细胞的迁移、侵袭、转移的进展中起着重要作用。明确MMP2与TIMP-4在结直肠腺癌的发生发展中的作用及其作用机制可为结直肠腺癌的早预防、早治疗提供新的研究思路。目的:观察MMP2和TIMP-4蛋白在结直肠腺癌、上皮内瘤变及正常组织中的表达,探讨其表达在结直肠腺癌发生、发展过程中的作用及其临床病理意义。方法:1.分别对20份经手术切除的新鲜结直肠腺癌及其配对的正常肠粘膜组织,采用实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)检测组织中MMP2和TIMP-4的m RNA表达量;2.分别对20份经手术切除的新鲜结直肠腺癌及其配对的正常肠粘膜组织,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测组织中MMP2和TIMP-4的蛋白表达情况;3.采用免疫组化法检测MMP2、TIMP-4蛋白在90例结直肠腺癌组织、30例高级别上皮内瘤变(HGIEN)组织,30例低级别上皮内瘤变(LGIN)组织及50例对应正常肠粘膜组织中的表达情况;4.分析MMP2和TIMP-4与CRA临床病理参数的关系,并探讨两者表达之间的相关性。结果:1.q RT-PCR结果提示MMP2和TIMP-4两种m RNA在结直肠腺癌和对应正常肠粘膜组织中的表达差异均有统计学意义(P<0.05);2.Western blot实验显示MMP2和TIMP-4两种蛋白在结直肠腺癌组织高表达,在对应正常肠粘膜组织中低表达;3.MMP2蛋白阳性表达定位于肿瘤细胞胞质中,呈现棕黄色颗粒状,阳性细胞呈片状分布。MMP2蛋白在结直肠腺癌、HGIEN、LGIN和正常肠组织中阳性表达率分别为81.11%(73/90)、63.33%(19/30)、40.00%(12/30)和18.00%(9/50)(P<0.001);TIMP-4蛋白阳性染色定位于肿瘤细胞胞质中,呈现棕黄色颗粒状,阳性细胞呈片状分布。在结直肠腺癌、HGIEN、LGIN和正常肠粘膜组织阳性率分别为87.78%(79/90)、73.33%(22/30)、40.00%(12/30)和26.00%(13/50)(P<0.001);4.MMP2蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期密切相关(P<0.05),与术前CEA、术前CA19-9、性别、年龄、脉管浸润均无关(P﹥0.05);TIMP-4蛋白表达与肿瘤大小、肿瘤分化程度、TNM分期密切相关(P<0.05),与性别、年龄、术前CEA、术前CA19-9、脉管浸润、淋巴结转移均无关(P﹥0.05);5.结直肠腺癌中MMP2与TIMP-4蛋白表达呈显著正相关(r=0.253,P=0.016)。结论:结直肠腺癌中MMP2和TIMP-4蛋白高表达,MMP2和TIMP-4表达失调可能共同参与结直肠腺癌的发生发展过程。