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目的:研究阿魏酸钠(SF)预处理24 h后,对心肌细胞A/R损伤的延迟保护作用,探讨SF这种作用与ROS-mPTP-Cyt c信号通路间的关系。
方法:采用原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组:①对照组(Control)组;②缺氧/复氧组(A/R)组;③缺氧预适应延迟保护组(DP)组;④阿魏酸钠预适应(SF)组。MTT法检测各实验组心肌细胞的存活率;按试剂盒说明检测各组心肌细胞培养液中LDH活性;流式细胞法检测各组心肌细胞内ROS含量、线粒体膜电位以及细胞凋亡情况;线粒体肿胀法检测各组心肌细胞线粒体mPTP开放情况;蛋白质印迹法检测各组心肌细胞浆内Cyt c的蛋白含量。
结果:①终浓度为3.36μ M·L-1SF预处理24 h后,心肌细胞存活率显著增加,细胞培养液中LDH活性显著降低。②终浓度为3.36μM·L-1SF预处理24 h后,心肌细胞内ROS生成显著减少,线粒体膜电位更为稳定,mPTP开放与细胞凋亡显著减少。③终浓度为3.36μ M·L-1SF预处理24 h后,心肌细胞浆内Cyt c的蛋白含量显著减少。
结论:SF预处理24 h后,可产生药理性延迟保护作用,其机制与其减少ROS生成--稳定线粒体膜电位--抑制mPTP开放,进而抑制细胞凋亡有关。