不同人群肠道肺炎克雷伯菌毒力及耐药情况研究

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目的:研究住院患者、肠道门诊腹泻患者、健康体检者三个不同人群肠道中肺炎克雷伯菌的携带状况、毒力基因、耐药性及其分子流行病学特点。方法:采集三个目标人群新鲜粪便标本接种于培养基上,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF MS) Vitek MS质谱仪鉴定筛选出肺炎克雷伯菌,拉丝试验检测高粘液表型,K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验;合成特异性引物对肺炎克雷伯菌株进行荚膜血清型(K1, K2, K5, K20, K54, K57)和相关毒力基因(wcaG, rmpA, magA和菌素)检测;PCR扩增广谱β-内酰胺酶基因、超广谱β-内酰胺酶基因、质粒介导的AmpC酶基因和碳青霉烯类耐药基因;扩增7对管家基因(rpoB, gapA, infB, gpi, PhoE, rpoB, tonB)对菌株进行多位点序列分型。结果:141株肺炎克雷伯菌分离自住院患者(54/125,携带率43.2%)、腹泻的门诊患者(44/257,携带率17.1%)和健康体检者(43/141,携带率30.5%)。共检测到49株产毒株,其中35株为高粘液表型菌株。K1型菌株检出14株(14/141,9.9%),K2型菌株检出15株(15/141,10.6%),K20和K57较少检出,而K54型菌株未检出;菌素基因检出率最高(30.5%),rmpA次之(19.9%),wcaG和magA检出率相对较低(分别为12.1%和9.9%)。健康体检者携带的肺炎克雷伯菌毒力检出率最高,其中K1/K2荚膜血清型、wcaG、rmpA、magA和菌素检出率显著高于住院患者来源的菌株,而对抗生素较敏感。住院患者携带的菌株抗生素耐药率最高,头孢菌素类抗生素耐药率大于30%,碳青霉烯类抗生素耐药率22.2%。肺炎克雷伯菌非产毒株抗生素耐药率显著高于产毒株,此外还检测到3株同时携带毒力基因和耐药基因的菌株(magA+Kl+blasHV-2,菌素+blaTEM-1+blaKPC-2,菌素+wcaG+blaCTX-M-14+blaSHV-1)。产毒株和非产毒株的序列基因型(ST)分布呈现不同的特点,非产毒株较为分散,而产毒株相对较为集中,ST23、ST86为其主要的ST型。ST23菌株均为K1荚膜血清型,ST65和ST86菌株均为K2型。结论:肺炎克雷伯菌在住院患者中携带率最高,毒力较低而抗生素耐药率最高;而健康人群携带较高比例的产毒株;产毒株比非产毒株对抗生素敏感性更高;特定的ST与毒力有一定的关联;健康人群携带肝脓肿流行克隆菌株,提示肝脓肿菌株来自胃肠道。
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