地梢瓜[Cynanchum thesioides(Freyn)K.Schum.]为萝藦科鹅绒藤属植物,为特色蒙药,蒙音名为“特莫-呼呼”,为蒙医临床常用治疗肠热痢疾、腹泻的经典方剂“茵达日-4汤”君药“度格模农”基原之一。1990年版《中国药典》附录中收载细叶白前子为萝藦科植物地梢瓜[Cynanchum thesioides(Freyn)K.Schum.]的干燥种子。《中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)》收载地梢瓜[Cynanchum thesioides(Freyn)K.Schum.]的干燥种子药用。目前地梢瓜质量标准极不完善,仅收载了性状及显微鉴别,无TLC鉴别、水分、灰分及浸出物等检查项,无含量测定项。目的:分析地梢瓜主要成分,并选择指标性成分,对指标性成分进行提取分离纯化鉴定,对指标性成分进行药理活性研究,建立起地梢瓜药材质量标准。方法:采用UPLC/Q-TOF-MS/MS确定地梢瓜中所含的化学成分,采用渗漉、萃取、硅胶柱层析、HPLC制备及结晶重结晶等方法提取分离纯化得到化学成分,结合紫外、氢谱、碳谱及质谱等对该化合物进行鉴定;将脂多糖(LPS)作用于人正常结肠上皮细胞(NCM460),观察LPS对NCM460细胞增殖的影响,同时用所得化合物(地梢瓜苷)进行干预,观察地梢瓜苷对NCM460细胞增殖的影响,并用MTT法检测细胞生长情况,试剂盒检测NCM460细胞的炎性因子表达水平,观察地梢瓜苷对白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的调控作用;参照《中国药典》方法建立地梢瓜药材质量标准,薄层色谱法对地梢瓜进行薄层鉴别,四部通则0832第二法(烘干法)对地梢瓜水分进行测定,四部通则2302总灰分测定法对地梢瓜灰分进行测定,四部通则2201浸出物测定法对地梢瓜中醇溶性浸出物进行测定,高效液相法对地梢瓜进行含量测定。结果:1.通过UPLC/Q-TOF-MS/MS分析确定地梢瓜中主要化学成分为地梢瓜苷,地梢瓜采用渗漉(95%乙醇、50%乙醇分别渗漉)、从正丁醇萃取部位分离得到一化合物,采用紫外、氢谱、碳谱及质谱等鉴定为地梢瓜苷。2.地梢瓜苷在0.01 mg/m L和0.02 mg/m L浓度时明显减轻LPS对NCM460细胞的生长抑制,同时可明显降低炎症因子IL-8和TNF-α的含量。3.建立了地梢瓜药材质量标准,形成了《地梢瓜质量标准草案》:1)以地梢瓜苷为对照品,建立了地梢瓜TLC鉴别方法。2)规定了地梢瓜各【检查】项的限度:水分不得超过于11.5%,总灰分不得超过7.5%,醇溶性浸出物的含量不得低于16.8%。3)建立地梢瓜中地梢瓜苷的HPLC含量测定方法,制定了限量规定:以干燥品计,地梢瓜果实中含地梢瓜苷不得少于0.05%。结论:1.对地梢瓜进行成分分析,确定地梢瓜中主要含有地梢瓜苷,通过提取分离纯化得到地梢瓜苷,地梢瓜苷对LPS诱导的NCM460细胞损伤有修复作用,并且抑制炎症因子炎症因子IL-8和TNF-α的分泌,地梢瓜苷可能是具有地梢瓜治疗腹泻的活性成分。地梢瓜苷可作为地梢瓜质量标准建立的指标性成分。2.以地梢瓜苷为对照品,对地梢瓜进行质量标准研究,形成了《地梢瓜质量标准草案》,进一步提高和完善了地梢瓜的质量标准。