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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)在临床症状上主要表现为流产、死胎、产木乃伊胎、仔猪成活率下降和育成猪呼吸系统病变等,给世界养猪业带来了严重的经济损失。PRRSV基因组中N基因编码的核衣壳蛋白(N蛋白)是本病毒的优势结构蛋白,并且具有良好的免疫原性和反应原性,是作为诊断PRRS的首选蛋白。本研究应用RT-PCR方法从PRRSV新疆分离株XJPRRSV1/03克隆得到了大小为372bp的N蛋白基因,并将扩增的N基因克隆到pMD18-T载体中进行测序。对该毒株N基因序列与国内外已发表的VR-2332、CH-1α、BJ-4和欧洲型代表株LV等12个毒株N基因序列的同源性进行比较发现:XJPRRSV1/03株N基因与北美型毒株N基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性分别为94.9-97.4%和95.2-98.4%,与欧洲型代表株LV株的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性分别为67.2%和64.5%。结果显示:XJPRRSV1/03株与S1株、VR-2332株、BJ-4株和FJ04株的同源性非常高,而与欧洲型代表毒株LV株的同源性非常低,表明XJPRRSV1/03株属于北美型毒株。根据XJPRRSV1/03株N基因序列设计了一对表达引物,分别在上、下游引物5’端引入EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,将扩增的N基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,构建重组表达质粒pGEX-6P-N,在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为39kDa的融合蛋白GST-N,与预期结果一致。通过对IPTG浓度和诱导时间的进一步优化发现,融合蛋白在37℃条件下,经终浓度为1.2mmol/L的IPTG诱导表达4.5h后获得了较高的表达水平。应用GST-Sepharose 4B亲和层析柱纯化GST-N融合蛋白,经BCA法测定蛋白浓度达到0.93mg/mL。Western blotting试验表明,GST-N蛋白能与抗PRRSV阳性血清发生特异性反应,经ELISA测定制备的兔抗N蛋白多抗效价达1:214。本研究为建立PRRSV N特异性抗体的间接ELISA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础,对新疆地区PRRS的防控具有重要的意义。