邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠生殖毒性的研究

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邻苯二甲酸酯类化合物(phthalate esters, PAEs)作为增塑剂大量存在于人们日常生活中,它主要作用是软化塑料和增强塑料的弹性,其毒性效应已得到人们的极大关注。在所有PAEs中,邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)是污染最严重、机体内暴露水平最高的PAEs之一,当DBP被人体吸收以后,能水解成邻苯二甲酸单丁酯(Mono-Butyl phthalate, MBP),尿液PAEs代谢产物检测显示,DBP代谢产物MBP含量最高,有研究表明MBP具有多种毒性,对动物生殖和发育有一定的影响,但其作用机制目前不十分明确,尚需进一步的研究结果来阐明。本论文从个体水平、组织水平和分子水平三个层面的研究来探讨MBP的毒性效应及损伤机制,通过对MBP暴露之后的小鼠进行体重及脏器系数的检测,睾丸组织病理学切片的观察和精子密度及精子畸形率的检测,来评价MBP暴露对小鼠睾丸组织产生损伤的程度。通过对睾丸组织氧化应激指标(活性氧簇,ROS;丙二醛,MDA;谷胱甘肽,GSH),能量代谢相关酶活性(乳酸脱氢酶,LDH;琥珀酸脱氢酶,SDH)的变化和与睾丸组织的发育,精子的发生作用的相关基因(Sox9、DAZL、drmtl)表达量的检测来探讨MBP产生毒性的可能机制。在正常情况和使用保护剂对睾丸组织进行保护条件下,通过对MBP暴露之后小鼠的睾丸组织损伤以及毒性的研究,探讨MBP造成小鼠的睾丸组织损伤的可能机制,并通过添加褪黑素作为保护剂,来研究褪黑素在MBP暴露之后对睾丸组织的保护效果及保护机制。实验结果表明:随着MBP的暴露,在100mg/kg/day浓度组可以导致小鼠睾丸组织出现损伤,生精小管萎缩,管腔内各种生精细胞明显减少,在2OOmg/kg/d ay浓度组小鼠睾丸病变进一步加重,间质细胞排列稀疏,分裂异常,数目大量减少,精子密度及精子畸形率也出现了显著性的下降。在100mg/kg/day和200mg/kg/day浓度组睾丸组织内ROS水平和MDA含量出现了显著性的上升,而GSH水平出现了显著性的下降,LDH活性及SDH活性下降显著。从50mg/kg/dayk开始,相关基因Sox9、DAZL的表达量显著性的下调。添加褪黑素(50 mg/kg/day)作保护剂时,200 mg/kg/day MBP浓度组,褪黑素可以减轻小鼠睾丸组织的损伤,降低睾丸组织中精子畸形率,精子密度得到恢复,且可以降低氧化应激,提升相关能量代谢酶活性,从而使MBP对小鼠睾丸组织的损伤情况得到一定程度的改善。
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