大青叶(Folium Isatidis)是我国传统中药十字花科植物菘蓝(Isatis tinctoriaL.)的干燥叶,主要化学成分含靛蓝、靛玉红、3-羟苯基喹唑酮、色氨酮、有机酸类等,具有解热、抗菌、抗病毒、抗内毒素及增强免疫力等作用,临床用于治疗流行性感冒、支气管炎、流行性乙型脑炎及流行性腮腺炎等疾病,取得了良好的效果。本研究观察中药大青叶四种提取物的体内外抗病毒活性及其可能的作用机制。目的：选择与人类呼吸道感染密切相关的RNA病毒中的甲型流感病毒(IAV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒B组3型(CVB3)及DNA病毒中的人腺病毒7型(Ad7)作为研究对象,探讨大青叶四种提取物(有效部位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)体外抗病毒的活性及作用机制；采用流感病毒感染小鼠肺炎模型,研究大青叶提取物(有效部位Ⅲ)体内抗甲型流感病毒(IAV)的病毒作用及可能机制。方法：实验分两个阶段。第一阶段为体外探讨大青叶四种提取物(有效部位Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ))抗病毒的活性及作用机制。从药物阻断病毒侵入细胞、药物直接灭活病毒及药物对病毒穿入细胞后的抑制作用三个方面来检测大青叶四种提取物抗IAV、RSV、Ad7和CVB3的作用方式。使用噻唑兰(MTT)比色法、光镜观察细胞病变效应(CPE)以及空斑减数试验(PRA)的方法观察大青叶四种提取物对传代狗肾细胞(MDCK)或人喉癌上皮细胞(HEp-2)的毒性浓度,检测细胞存活率以及药物对病毒的抑制率。第二阶段,建立甲型流感病毒感染小鼠肺炎模型,选择大青叶提取物(有效部位Ⅲ)对流感病毒感染小鼠进行治疗,分为3个剂量组(200mg/kg/d,100mg/kg/d,50mg/kg/d),连续给药5d后,观察病毒感染15d内小鼠存活率及体重变化,使用肺指数评价小鼠肺脏炎症程度,采用实时定量PCR方法检测不同剂量大青叶有效部位对流感病毒RNA表达的影响,观察小鼠肺组织病理切片了解肺脏炎症,评价大青叶提取物体内抗IAV活性。结果：1.大青叶四种提取物具有较好的体外抗多种病毒(RSV、Ad7、CVB3和IAV)的活性。四种提取物中,大青叶有效部位Ⅲ对HEp-2细胞的TD50分别为57.09±2.92μg/ml;大青叶有效部位Ⅰ、Ⅱ对HEp-2细胞的TD50分别为23.15±1.49,18.9±2.01μg/ml.大青叶有效部位Ⅰ、Ⅱ药物浓度<15μg/ml时,对HEp-2和MDCK细胞没有显著细胞毒性。在四种大青叶提取物中,大青叶有效部位Ⅰ、Ⅱ对HEp-2和MDCK细胞的毒性最大。2.通过感染前、感染时或感染后给予大青叶四种提取物,大青叶四种提取物均对病毒穿入细胞后有很好的抑制作用。随着药物浓度的增加,病毒的抑制率增加。大青叶有效部位Ⅲ、Ⅳ选择指数高于其它2组,且细胞毒性作用小,抑制病毒增殖更有效。大青叶四种提取物中,大青叶有效部位Ⅲ对IAV选择指数最高。大青叶四种提取物对病毒侵入细胞无阻断作用,对病毒亦无直接灭活作用。3.体内实验中,大青叶有效部位Ⅲ以200mg/kg/d、100mg/kg/d、50mg/kg/d剂量给药,较病毒对照组,有效部位Ⅲ能明显降低小鼠病毒性肺炎死亡率(P<0.01),延长小鼠平均存活天数(P<0.01),减缓病毒感染小鼠体重下降。大青叶有效部位Ⅲ可降低流感病毒感染小鼠的肺指数,肺指数下降与时间和药物浓度有一定的关系。另外,大青叶有效部位Ⅲ高剂量组(200mg/kg/d)对流感病毒病毒RNA抑制率最高。因此,大青叶有效部位Ⅲ能够保护小鼠,提高流感病毒感染小鼠的存活率,降低肺炎小鼠肺指数和抑制小鼠肺组织流感病毒RNA复制。4.体内实验中,大青叶有效部位Ⅲ可减缓致死性流感病毒感染小鼠导致的病毒性肺炎的病理性损伤,在给予药物处理后,随着药物剂量的增加,病毒性肺炎的病变程度明显减轻。高剂量组细支气管和小血管壁周围有少量淋巴细胞及单核细胞的浸润,粘膜较正常,病变程度较病毒组明显减轻。结论：1.大青叶四种提取物具有较好的体外抗多种病毒(IAV、RSV、Ad7和CVB3)的活性,其作用方式主要通过影响病毒穿入细胞后发挥抑制作用。2.大青叶有效部位Ⅲ能提高流感病毒感染小鼠的存活率,减缓小鼠体重的下降,减轻小鼠肺组织病变程度,降低肺炎小鼠的肺指数和流感病毒RNA水平,证明大青叶有效部位Ⅲ具有较好的体内抗甲型流感病毒的作用。