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β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的细菌分泌的一种胞外酶,可选择性分解β-内酰胺类抗生素,是绝大多数致病菌对青霉素类药物产生耐药的主要原因。在牛奶中加入β-内酰胺酶后,能将β-内酰胺类抗生素全部降解,从而达到掩盖牛奶含有抗生素的目的。β-内酰胺酶在我国奶牛养殖和牛奶生产中很大程度上持续存在。因此,为确保牛奶及乳制品质量安全,保障消费者健康,建立牛奶中β-内酰胺酶的检测技术十分必要。牛奶中β-内酰胺酶的检测方法中微生物法灵敏度高,但检测时间较长;碘量法、高效液相色谱法等操作复杂,需要特殊的仪器设备。免疫胶体金层析法是一种快速、灵敏、特异和安全的检测技术,可以实现现场快速检测,为大规模筛选提供技术支持。本研究采用小鼠体内诱生法制备抗TEM1型β-内酰胺酶单克隆抗体,采用兔背部多点注射的方法制备抗TEM1型β-内酰胺酶的多克隆抗体。两种抗体经辛酸-硫酸铵法纯化后进行质量鉴定,单抗和多抗的蛋白质浓度分别为10mg/mL、6mg/mL。间接ELISA测得抗体效价分别为1:320 000和1:80 000。双抗夹心法结果表明两种抗体对TEM1型β-内酰胺酶的特异性较高,且对头孢菌素酶无交叉反应性。采用柠檬酸三钠还原法制备出质量高、直径20nm的胶体金颗粒,对多克隆抗体进行标记的最适蛋白量为72μg/mL,最适pH值以加入0.1mol/L K2CO3的体积衡量,为35μL。金标抗体经纯化后采用浸泡法吸附在Ahlstrom8964玻璃纤维素膜上。将抗TEM1型β-内酰胺酶的单抗包被在NC膜上作为检测线,羊抗兔二抗作为质控线,并对免疫层析试纸条的样品垫、NC膜、金标垫等材料筛选以及相关处理液进行了优化。分别经过处理干燥后与吸水纸、PVC板组装成试纸条。所制备出的试纸条对PBS基质和牛奶基质中的最小检出限为6U/mL和10U/mL,4℃可保存三个月。本研究对胶体金免疫层析检测TEM1型β-内酰胺酶进行了初步研究。采用双抗夹心法建立了TEM1型β-内酰胺酶的胶体金免疫层析方法,制备出快速检测试纸条,该试纸条灵敏度、特异性、稳定性均良好。