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目的血浆同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)水平升高是动脉粥样硬化(Atheroslerosis,AS)的一项独立危险因素。由于降低Hcy治疗对于心血管疾病风险的影响还有较大争议,截止目前,血浆Hcy是否可以作为一个可调节的危险因素还不清楚。因此进一步了解Hcy致AS机制及药物降低Hcy同时对AS形成的影响成为亟待解决的科学问题。Hcy和叶酸通过一碳单位代谢途径将甲基转移给DNA、组蛋白等大分子物质参与其调控基因表达功能。动物实验已经证实DNA甲基化在AS形成和心血管疾病发生中扮演重要角色。但目前的大多数研究并没有探讨血浆Hcy水平升高对DNA甲基化的影响和叶酸是否具有保护作用。由于在不同组织、不同基因、不同位点的甲基化水平是不同的,所以,通过单个基因甲基化水平及表达研究有助于我们更好地理解Hhcy的病理生理学机制。动脉粥样硬化发病机制复杂,凋亡参与动脉粥样硬化不同时期发生发展。Hcy可诱导血管平滑肌细胞增殖,凋亡减弱。导致细胞过度增殖的一个重要原因就是凋亡减弱。Bcl-2是凋亡信号通路的重要因子,具有抗凋亡作用,参与调节脂质过氧化和炎症刺激后血管的凋亡过程,可以作为治疗AS的关键靶点。但目前有关Hhcy对Bcl-2基因甲基化水平的影响和叶酸是否具有拮抗作用的研究未见报道。本研究从DNA甲基化角度探讨Hcy在AS形成中的作用和叶酸的拮抗作用,为进一步治疗AS这一全球医学难题提供理论依据。方法健康6周龄雄性wistar大鼠36只,体重(160±10)g,适应性喂养一周后随机分为对照组,高同型半胱氨酸组,和叶酸干预组,每组12只。对照组给予AIN-93G配方饲料,高同型半胱氨酸组饲以含1.7%蛋氨酸的AIN-93G配方饲料,叶酸干预组饲以含1.7%蛋氨酸和0.008%叶酸的AIN-93G配方饲料。喂养18周后,全自动生化仪测定血浆Hcy、叶酸浓度;取大鼠胸主动脉进行苏木素-伊红(HE)染色,观察主动脉组织形态学变化;免疫组化检测的主动脉组织Bcl-2基因表达,改进酶联免疫吸附测定法(MDQ1)检测大鼠主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平。结合重亚硫酸盐限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)法检测LINE-1序列甲基化水平;巢式降落式PCR联合甲基化特异性PCR(MSP)检测主动脉组织Bcl-2基因启动子区甲基化水平;荧光RT-PCR检测主动脉组织Bcl-2mRNA表达。结果18周蛋氨酸饮食可以诱导大鼠高同型半胱氨酸血症,叶酸摄入可以拮抗血浆同型半胱氨酸(Hcy)升高(P<0.01)及其介导的主动脉形态学变化;高同型半胱氨酸组主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平明显低于对照组(P<0.01, P<0.01);高同型半胱氨酸组主动脉组织LINE-1序列甲基化水平低于对照组(P<0.05);高同型半胱氨酸组主动脉组织Bcl-2表达增加;Bcl-2基因启动子区甲基化水平低于对照组(P<0.05),Bcl-2基因mRNA表达高于对照组(P<0.05)。叶酸干预后,主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平明显升高(P<0.01,P<0.05),主动脉组织LINE-1序列甲基化水平升高(P<0.05)。主动脉组织Bcl-2阳性细胞数目减少,Bcl-2基因启动子区甲基化水平高于高同型半胱氨酸组(P<0.05),Bcl-2mRNA表达低于高同型半胱氨酸组(P<0.05)。结论叶酸摄入不仅可以拮抗血浆Hcy水平升高,而且升高主动脉组织DNA甲基转移酶活力和基因组总甲基化水平。高同型半胱氨酸血症通过降低Bcl-2甲基化水平,使抗凋亡基因Bcl-2表达增加,平滑肌细胞凋亡减弱,可能是其参与动脉粥样硬化形成的分子机制之一。叶酸摄入可以拮抗高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉组织Bcl-2低甲基化水平,使Bcl-2表达减弱,可能是其参与抗动脉粥样硬化形成的分子机制之一。