水牛是我国的非常重要的畜牧品种,具有适应性强、抗病力强、乳质优良、使用年限长、易饲养、水牛奶干物质含量高,营养成分优于黑白花水牛奶,加工优势明显等有点。我国是世界上水牛存栏量第三大国,仅次于印度和巴基斯坦,在我国农业经济中扮演着重要角色。由于长期用于役用,我国水牛在产奶量及体型上不及外国摩拉、尼里/拉菲等品种,我国于1957年开始引进外来水牛品种,用于改善我国水牛的生产性能。水牛分为沼泽型水牛和河流型水牛两亚种,沼泽型水牛染色体数2n=48,河流型水牛染色体数为2n=50,我国水牛主要为沼泽型水牛。两亚种水牛杂交一代F1的染色体数为2n=49,此染色体数目的水牛由于生殖细胞在减数分裂期间染色体可能行不平衡分离,形成遗传物质不足或过多的异常配子,致使其繁殖力严重下降。遗传育种工作中,我们需要将2n=49的公牛进行淘汰处理,杜绝父本异常配子,提高群体正常配子率。目前用于区分染色体数目的主要技术是染色体的核型分析,但目前对水牛核型分析的方法最终结果并不好,沼泽型水牛的染色体分带尚处于带型少、模糊不清状态,故本实验主要为改善水牛核型分析的条件,进行水牛核型高分辨分析,然后对沼泽型水牛染色体和河流型染色体G带带型进行高分辨的比较分析。主要研究结果如下:(1)通过比较两种不同的细胞接种培养方法,发现取全血静止40～60 min后的上清进行淋巴细胞的培养能得到较好的培养结果,各五组分别加入1×10~5淋巴细胞,血清组接种回收细胞(5.791±1.834)10~5个显著(P<0.05)高于全血组回收细胞(2.894±0.786)10~5个。(2)通过对核型分析步骤中秋水仙素加入量及处理时间的改变,发现收集细胞前10min加入200μg/ml秋水仙素100μl最后得到的结果明显优于传统的收集细胞前3h加入0.01μg/ml秋水仙素30μl,其中对每组10张载玻片,每片20个分裂相进行测量,结果1号染色体长度>18μm分裂相高浓度低时长组的占比为56.5±11.07%,低浓度高时长组占比为26.5±8.52%,差异极显著(P<0.01)。(3)对滴片时加滴一滴新鲜固定剂与传统的不加滴固定剂比较,发现加滴新鲜固定剂组表现为染色体整体分散更加良好,染色体间互相交叉的比例较单滴细胞悬液低;其中加滴组分裂相优良43.5±6.69%,不加滴组为17±7.89%,差异极显著(P<0.01)。(4)对滴片环境湿度进行控制,分为50%、60%、70%、80%几个湿度梯度,发现湿度为发现70%湿度下滴片效果最好,呈I型的染色体分裂相占82±12.74%,80%湿度占95±5.27%但染色体分散不佳,而60%和50%较差,分别为10±5.77%和2.5±3.54%。(5)根据改良的核型分析方法制作沼泽型水牛和河流型水牛染色体核型,对两种水牛进行G带的比较分析,发现两亚种水牛的染色体带型高度相似,并分别做出沼泽型水牛700条带、河流型水牛710条带的模式图。