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目的:本试验旨在体外筛选出能够促进蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞增殖的中药单体化合物,并探讨中药单体化合物促进颗粒细胞增殖的可能机制。方法:试验选取200日龄的海兰褐蛋鸡,分离培养小黄卵泡颗粒细胞,使用间接免疫荧光法对颗粒细胞进行鉴定。噻唑蓝比色法（MTT）检测各中药单体化合物在颗粒细胞上的最大安全浓度;通过实时荧光定量PCR（q PCR）检测各中药单体化合物对颗粒细胞增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）m RNA的相对表达量和流式细胞术检测各中药单体化合物对颗粒细胞增殖细胞百分比的影响,筛选能够促进蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞增殖的中药单体化合物。通过流式细胞术检测有效化合物淫羊藿苷对颗粒细胞细胞周期（Cell cycle）分布的影响;q PCR和western blot检测其对细胞周期蛋白E1（Cyclin E1）、细胞周期蛋白A2（Cyclin A2）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（Cyclin-dependent kinase 2,CDK2）表达的影响,阐述淫羊藿苷促进颗粒细胞增殖的机制。结果:1.小黄卵泡颗粒细胞培养24 h,细胞贴壁完全,聚集生长,生长状态良好。24-48 h期间,细胞舒展,迅速生长。颗粒细胞培养48 h后,细胞铺满板底。间接免疫荧光法结果显示,颗粒细胞中FSHR呈阳性表达,表明分离提取细胞为颗粒细胞。2.异补骨脂素在颗粒细胞上的最大安全浓度为80μg/m L,野黄芩苷为125μg/m L,绿原酸为125μg/m L,黄芪甲苷为240μg/m L,紫丁香苷为2.4 mg/m L,淫羊藿苷为80μg/m L。3.与空白对照组相比较,1.25μg/m L异补骨脂素（p<0.001）,1.953μg/m L野黄芩苷（p<0.001）,7.813μg/m L绿原酸（p<0.001）,3.75μg/m L黄芪甲苷（p<0.05）,37.5μg/m L紫丁香苷（p<0.001）,20μg/m L和5μg/m L淫羊藿苷（p<0.001）均能提高颗粒细胞PCNA m RNA的相对表达量。流式细胞术结果显示,与空白对照组相比,只有20μg/m L淫羊藿苷处理颗粒细胞24 h后,增殖细胞百分比显著升高了10.24%（p<0.05）。其他化合物并没有显著升高增殖细胞百分比。综合q PCR和流式细胞术检测结果,淫羊藿苷具有促颗粒细胞增殖的作用。4.淫羊藿苷处理24 h之后,与空白组相比,20μg/m L处理组颗粒细胞的PCNA m RNA相对表达量显著升高（p<0.001）;40μg/m L、20μg/m L和10μg/m L处理组颗粒细胞的PCNA蛋白相对表达量均显著升高（p<0.001）。40μg/m L和10μg/m L处理组对颗粒细胞S期细胞的比例无显著影响（p>0.05）,20μg/m L处理组显著升高了颗粒细胞S期细胞的比例（p<0.01）,表明淫羊藿苷通过影响细胞周期分布促进颗粒细胞的增殖。5.qPCR结果显示:淫羊藿苷处理24 h之后,与空白组相比,20μg/m L处理组cyclin E1 m RNA的相对表达量均显著升高（p<0.001）,40μg/m L和10μg/m L处理组cyclin E1m RNA的相对表达量无显著变化;淫羊藿苷在20μg/m L（p<0.001）和10μg/m L（p<0.05）时显著升高cyclin A2 m RNA的相对表达量,40μg/m L处理组无显著变化;CDK2 m RNA的相对表达量在40μg/m L（p<0.01）、20μg/m L（p<0.001）和10μg/m L（p<0.001）组内均能显著升高。Western blot结果显示:淫羊藿苷处理24 h之后,与空白组相比,40μg/m L和20μg/m L处理组cyclin A2的蛋白表达量显著升高（p<0.001）,10μg/m L处理组cyclin A2的蛋白表达量无显著变化（p>0.05）;cyclin E1的蛋白表达量在40μg/m L（p<0.05）、20μg/m L和10μg/m L处理组（p<0.001）表达量显著升高;40μg/m L和20μg/m L处理组CDK2的蛋白表达量显著升高（p<0.001）,10μg/m L处理组CDK2的蛋白表达量无显著变化（p>0.05）。综合q PCR和western blot结果提示,淫羊藿苷通过上调蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞S期相关蛋白cyclin E1,cyclin A2和CDK2基因和蛋白的相对表达量,来推动细胞周期S期的进程。结论:1.在所设置剂量范围内,确定了淫羊藿苷、异补骨脂素、野黄芩苷、绿原酸、黄芪甲苷和紫丁香苷在蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞上的最大安全浓度。综合q RCR和流式细胞术检测结果,明确只有淫羊藿苷具有促进蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞增殖的作用。2.20μg/m L淫羊藿苷通过促进cyclin A2、cyclin E1和CDK2蛋白表达来推动细胞周期S期的进程以诱导颗粒细胞增殖。